内质网应激通路在十溴联苯醚致小鼠海马神经元细胞系HT-22细胞凋亡中作用

发布时间：2017-04-12 01:07

  本文关键词：内质网应激通路在十溴联苯醚致小鼠海马神经元细胞系HT-22细胞凋亡中作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 研究十溴联苯醚（decabromodiphenyl ether，BDE-209）暴露对小鼠海马神经元细胞系（HT-22细胞）的细胞生长形态结构、细胞存活率、细胞凋亡损伤和内质网应激通路中的相关蛋白caspase12、GRP78、PERK蛋白表达水平的影响，初步讨论BDE-209对HT-22细胞凋亡的影响和诱导凋亡的机制，为研究BDE-209致HT-22细胞凋亡的机制提供依据。 方法 培养HT-22细胞之后暴露于BDE-209中，总共分为6个剂量组，分别为对照组（含有1%DMSO的培养基）和剂量组（剂量分别为6.25μg/ml BDE-209、12.5μg/mlBDE-209、25μg/ml BDE-209、50μg/ml BDE-209、100μg/ml BDE-209）。每个实验组设置3个平行样。染毒24小时之后在倒置显微镜下观察每组的细胞形态差异；MTT比色分析法检测每组细胞存活率；Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡情况；采用免疫印迹法检测HT-22细胞中caspase12、GRP78、PERK蛋白的表达情况。 结果 倒置显微镜观察各个处理组的HT-22细胞形态，实验组可以观察到细胞形态有所变形，细胞胞膜有发泡现象，随着染毒剂量的增加，神经突起变短，细胞空泡增加。在C（12.5μg/ml BDE-209）、D（25μg/ml BDE-209）、E（50μg/ml BDE-209）染毒剂量组可以看到细胞有明显的皱缩、空泡、脱落、消失。在F（100μg/mlBDE-209）染毒剂量组中细胞几乎已经完全脱落。MTT比色法检测HT-22细胞存活率，不同剂量染毒24小时与对照组相比，染毒剂量组细胞存活率显著下降，其中染毒剂量为12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml组差异具有统计学意义（P0.05）；同一剂量BDE-209染毒不同时间时细胞存活率也相应下降，染毒时间为8小时、12小时、16小时、20小时、24小时、30小时的细胞存活率与对照组相比具有统计学差异（P0.05）。Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡情况，用试剂盒进行染色之后用流式细胞仪进行检测，结果显示：随着染毒剂量的增加，分布在第二象限的早期凋亡细胞和第三象限的晚期凋亡细胞的比例呈现增加的趋势，而第一象限的正常细胞的比例则逐渐减少。免疫印迹结果显示：染毒剂量为12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml组与对照组之间caspase12、GRP78、PERK蛋白表达增加，caspase12/β-actin、GRP78/β-actin、PERK/β-actin之间差异有统计学意义（P0.05）。 结论 BDE-209染毒可以导致HT-22细胞形态发生改变和存活率的显著降低，并与BDE-209的染毒时间和剂量呈现一定的时间和剂量效应关系。BDE-209暴露可以导致HT-22细胞凋亡，并引起内质网应激相关蛋白caspase12、GRP78、PERK的表达增加。
【关键词】：十溴联苯醚 HT-22细胞 细胞凋亡 内质网应激
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R114
【目录】：

• 英文缩略词表6-8
• 中文摘要8-10
• Abstract10-13
• 1 前言13-16
• 2 材料与方法16-27
• 2.1 实验细胞16
• 2.2 仪器设备16-17
• 2.3 主要试剂17-18
• 2.4 细胞培养和细胞蛋白上清提取18-19
• 2.5 总蛋白含量的测定19-20
• 2.6 细胞培养及实验前准备20-21
• 2.7 BDE-209 处理21
• 2.8 内质网应激相关蛋白的 western blot 检测21-25
• 2.9 MTT 检测细胞毒性25-26
• 2.10 流式细胞仪检测细胞凋亡-Annexin V/PI 双染色法26-27
• 2.11 图像获取及数据处理27
• 3 结果27-35
• 3.1 BDE-209 染毒对小鼠海马神经元细胞系（HT-22）细胞形态的影响27-28
• 3.2 BDE-209 不同染毒剂量和不同的染毒时间对 HT-22 细胞存活率的影响28-31
• 3.3 BDE-209 染毒对 HT-22 细胞凋亡水平的影响31-32
• 3.4 BDE-209 染毒对 HT-22 细胞中 Casepase12、GRP78、PERK 蛋白表达水平的影响32-35
• 4 讨论35-40
• 结论40-41
• 参考文献41-47
• 附录47-49
• 致谢49-50
• 综述50-66
• 参考文献59-66

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 刘俊晓;霍霞;;多溴联苯醚对哺乳动物的毒性作用及机制[J];癌变.畸变.突变;2008年06期

2 王兴华;张照祥;丁书姝;邹立巍;樊雯婧;翟金霞;;PBDE-209致小鼠肝脏病理学改变及其氧化应激机制研究[J];中华疾病控制杂志;2012年03期

3 沈华萍;黄长江;陆芳;杨军华;TANGUAY Robert;孙鲁浙;董巧香;;PCBs和PBDEs对人类癌细胞和斑马鱼胚胎的毒性对比(英文)[J];生态毒理学报;2009年05期

4 邹立巍;翟金霞;樊雯婧;王汉永;刘婷;王兴华;;十溴联苯醚对小鼠学习记忆能力及海马NOS和NO的影响[J];中国工业医学杂志;2012年05期

5 张莹,孙黎光;GRP78的研究进展[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);2005年03期

6 陈敦金;余琳;廖秦平;屈委月;;母源性BDE-209胃灌后对子鼠学习记忆能力的影响以及血清BDE-209浓度的测定[J];中华围产医学杂志;2006年06期

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本文编号：300361