市售肉菜产ESBLs和碳青霉烯酶肠杆菌的分子流行病学研究

发布时间：2017-04-12 15:01

  本文关键词：市售肉菜产ESBLs和碳青霉烯酶肠杆菌的分子流行病学研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：随着抗生素的广泛使用,肠杆菌耐药成为全球面临的突出问题。细菌耐药性的产生使耐药肠杆菌对目前临床上使用的抗生素不再敏感,包括第三、四代头孢菌素、碳青霉烯类药物等,产ESBLs(Extended-spectrumβ-lactamases)和碳青霉烯酶是细菌对上述药物产生耐药性的主要机制之一,也是目前耐药性研究的热点之一。对不同来源的抗生素耐药菌研究中,食品源研究尚不多见,本文对蔬菜源及鸡肉源大肠杆菌耐药性及其ESBLs和碳青霉烯酶基因的分子流行病学进行初步研究,以了解蔬菜及动物食品中耐药肠杆菌的流行情况,为防止耐药基因的传播提供依据。2014~2015年,从广州各大市场以及超市随机采集了395份蔬菜样品和200份鸡肉样品,分离得到60株大肠杆菌(蔬菜)和134株大肠杆菌(鸡肉)。另外,从395份蔬菜样品中用选择性平板筛选出33株产ESBLs肠杆菌,包括12株大肠杆菌、19株肺炎克雷伯菌、1株阴沟肠杆菌和1株弗氏柠檬酸杆菌。用琼脂稀释法对随机分离得到的大肠杆菌进行药物敏感性检测,结果显示肉源大肠杆菌对各种药物的耐药情况比蔬菜源更严重。33株蔬菜源产ESBLs肠杆菌对氨苄西林和头孢噻肟全部耐药,对头孢喹肟、四环素、磷霉素、多西环素、喹乙醇、复方新诺明的耐药率均超过50%,对亚胺培南全部敏感。33株蔬菜源产ESBLs肠杆菌共检测到7种不同亚型的CTX-M基因,分别是bla~(CTX-M)-3、bla~(CTX-M)-15、bla~(CTX-M)-55、bla CTX-M-14、bla CTX-M-24、bla CTX-M-38和bla CTX-M-65,检出率最高的是bla CTX-M-15(n=10),其次是bla~(CTX-M)-55(n=7)。不同蔬菜中bla~(CTX-M)基因的检出率分别为黄瓜10.4%(12/115)、番茄3.3%(3/90)、生菜13.0%(13/100)和胡萝卜5.7%(5/90)。从生菜样品中检测到一株产KPC-2的大肠杆菌TS79,多序列位点分型结果为ST877型。该基因位于一个大小约54kb的质粒上,复制子分型未成功。药物敏感性结果显示TS79对黏菌素和替加环素敏感,对其他药物全部耐药。另外从超市生鲜鸡肉中分离到的一株亚胺培南耐药大肠杆菌THSJ02,多序列位点分型结果为ST167型,除对多西环素和替加环素敏感以外,对其余药物全部耐药,PCR结果显示该菌携带mcr-1、blaNDM-9、flo R、fos A3、rmt B和bla~(CTX-M)-65基因。经接合试验、S1-PFGE和southern杂交证实mcr-1基因位于Inc I2型质粒上,rmt B,bla~(CTX-M)-65和fos A3基因位于F33:A :B 质粒上,而blaNDM-9和另一个fos A3基因位于一个约100kb的未知质粒上。本研究结果表明蔬菜和动物性食品中存在耐药肠杆菌,蔬菜源产ESBLs肠杆菌中以产CTX-M-15和CTX-M-55居多,且存在多重耐药现象。这是首次在蔬菜中检出对大部分抗生素耐药的产KPC酶的大肠杆菌及在鸡肉中检出同时携带blaNDM-9和mcr-1基因的大肠杆菌。因此,我们应当重视食品安全隐患,避免其成为耐药基因传播的途径,以保障人类健康。
【关键词】：食品源 肠杆菌 ESBLs 碳青霉烯酶 bla~(CTX-M)
【学位授予单位】：华南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R155.5
【目录】：

• 摘要2-4
• Abstract4-6
• 英文缩写对照表6-9
• 1 前言9-14
• 2 材料与方法14-36
• 2.1 材料14-19
• 2.1.1 样品来源14
• 2.1.2 菌株及载体14
• 2.1.3 抗菌药物及药敏纸片14-15
• 2.1.4 培养基及其配制15-16
• 2.1.5 试剂16
• 2.1.6 主要仪器设备16-17
• 2.1.7 主要试剂的配制17-19
• 2.2 方法19-36
• 2.2.1 细菌的分离鉴定与保存19-21
• 2.2.2 耐药基因的PCR检测及其他相关基因检测21-24
• 2.2.3 琼脂稀释法敏感性试验24-25
• 2.2.4 大肠杆菌MLST分析25-27
• 2.2.5 接合试验及阳性接合子复制子分型27-30
• 2.2.6 大肠杆菌接合子 S1-PFGE 分析30-33
• 2.2.7 Southern杂交33-36
• 3 结果与分析36-45
• 3.1 肠杆菌的分离与鉴定36-39
• 3.1.1 大肠杆菌的分离36
• 3.1.2 产CTX-M肠杆菌分离鉴定36-39
• 3.2 药物敏感性试验39-41
• 3.2.1 随机分离大肠杆菌药敏试验39-40
• 3.2.2 肠杆菌药敏试验40-41
• 3.3 肉菜产KPC、NDM酶大肠杆菌的分子特性41-45
• 4 讨论45-49
• 4.1 鸡肉和蔬菜源大肠杆菌药物敏感性比较45
• 4.2 蔬菜源产ESBL肠杆菌流行情况45-46
• 4.3 产碳青霉烯酶大肠杆菌分子特性46-49
• 5 结论49-50
• 致谢50-51
• 参考文献51-58
• 附录58

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