p25-CDK5-p53信号通路在甲醇致SK-N-SH细胞凋亡中的作用机制研究

发布时间：2021-02-02 19:52

　　目的通过不同浓度甲醇染毒SK-N-SH细胞后,检测细胞活力、细胞凋亡情况、氧化应激水平以及相关因子（Calpain2、p35、p25、CDK5、p53）的基因与蛋白表达水平,探究p25-CDK5-p53信号通路在甲醇致SK-N-SH细胞凋亡中的作用机制,为甲醇的神经毒性提供一定的理论依据。方法选取体外培养的SK-N-SH细胞,采用不同浓度甲醇（0-2000mmol/L）分别染毒细胞24、48h,CCK-8法检测细胞活力,确定后续甲醇染毒浓度为0、250、750、1250mmol/L（对照、低、中、高甲醇浓度组）,染毒时间为24h。染毒24h后,显微镜观察细胞形态;Annexin V-FITC双染检测细胞凋亡;活性氧（ROS）试剂盒检测ROS水平;RT-PCR技术检测Calpain2、CDK5、p35、p25、p53的基因表达水平;Western blot检测Calpain2、CDK5、p25、p35、p53及p53磷酸化蛋白表达水平。结果1.甲醇染毒24、48h后,细胞活力均分别从（100.00±0.00）%下降至（16.03±0.72）、（9.66±0.37）%,差异具有统计学意义（... 

【文章来源】：宁夏医科大学宁夏回族自治区

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

不同浓度甲醇染毒SK-N-SH细胞24h、48h后细胞活力（n=3，X±S）

细胞的大小、形态、贴壁力等都具有明显的改变。对照组（图2-A）SK-N-SH 细胞呈不规则的三角形或梭形生长，有较长的突起，细胞之间间隙较小，连接较为紧密，为扁平的单层贴壁生长的神经胶质瘤细胞；低浓度甲醇组（图 2-B）有个别细胞变为圆形；中浓度甲醇组（图 2-C）部分细胞缩短变圆，形状有些似多角形，有些细胞呈圆形，细胞间隙增大，部分细胞漂浮失去贴壁力；高浓度甲醇组（图 2-D），细胞间隙明显增大，细胞折光性变强，大部分细胞变圆，漂浮在培养液中，少部分细胞正常贴壁。18


本文编号：3015279