mTOR信号通路在锰致多巴胺能神经元凋亡中作用机制研究

发布时间：2021-02-25 17:16

　　目的:探讨mTOR信号通路在锰诱导多巴胺能神经元凋亡中的作用及机制,为锰致神经损伤的防治提供理论和实验依据。方法:以大鼠多巴胺能神经细胞系（简称“N27细胞”）、慢病毒介导的沉默mTOR基因的N27细胞（shRNA-mTOR）及其空白对照细胞（shRNA-GFP）为研究对象。按照MnCl₂浓度设置空白对照组及低、中高剂量组对应浓度分别为0、200/400/800μM,对上述细胞进行24 h锰暴露处理。染锰后在倒置显微镜下观察细胞形态;采用CCK8法测定细胞活性;AnnexinV Alexa Fluor 647/PI凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率;应用Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase-3、mTOR及下游效应蛋白S6K1、4E-BP1、Akt、SGK1的总蛋白和磷酸化蛋白的表达。结果:1、CCK8实验发现,锰对N27细胞的活性的影响呈时间、剂量效应关系,细胞的活性随着染锰时间和剂量的增加而下降,差异有统计学意义（P<0.05）;2、倒置显微镜下观察到相应的细胞形态变化,并随着染锰浓度增加,细胞形态异常及死亡数量增加;3、... 

【文章来源】：遵义医科大学贵州省

【文章页数】：47 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

锰诱导N27细胞形态改变

遵义医科大学硕士学位论文 岑语燕2.2 锰诱导 N27 细胞活力下降如图 2 所示，N27 细胞在 10 个不同的 MnCl2浓度下作用 24 h 和 48 h，染锰组细胞的活力与对照组的均有差异（P<0.05），当 MnCl2浓度为 100 μM 的时候，24 h 和 48 h 锰作用后的结果表明细胞存活率有所提高（P<0.05），但当锰浓度和锰作用时间增加后，细胞的存活率逐渐下降，锰对 N27 细胞的毒性作用呈时间-效应和剂量-效应关系。

17图 3AnnexinVAlexa Fluor 647/PI 检测不同处理组对细胞凋亡率的影响Fig.3 Detect the cell apoptotic rate with AnnexinV Alexa Fluor 647/PI.xinV Alexa Fluor 647/PI 双染细胞流式图；B：AnnexinV Alexa Fluor 647/PI 双染细胞流式分均值±标准误(n=3)表示，a：与对照组相比 P<0.05；b：与 200 μM 组相比 P<0.05；c：与<0.05。

【参考文献】：
期刊论文
[1]SOD类似物阻断百草枯诱导的N27细胞凋亡的作用[J]. 陈平,陈震,李昂,赵春军,吴晓康,徐雍羽,梁立平.  中国生化药物杂志. 2008(05)



本文编号：3051297