淡色库蚊溴氰菊酯抗性基因XN-P450的克

发布时间：2021-03-09 06:13

　　淡色库蚊是一种分布极广的全球性卫生害虫，能够传播多种致命疾病。对其的防治主要是使用各类化学杀虫剂，这引起了杀虫剂抗性的产生和发展。淡色库蚊抗性机理及抗性基因的研究成为热点。本论文以淡色库蚊为材料进行了以下三方面的实验：1.比较使用了五种改良的方法：异硫氰酸胍法、Trizol法、Trizol+CTAB法、改良的Trizol法和CTAB法，从淡色库蚊抗性品系中提取总RNA，通过对所提总RNA的纯度、浓度、完整性以及耗用时间等方面进行比较，并以实时荧光定量PCR的方法来定量比较了五种方法所提取产物中RNA的拷贝数，结果显示：改良的CTAB法为淡色库蚊总RNA提取的最优法。2.以淡色库蚊抗性相关的EST（EC093830.1）序列为模板，设计基因特异性引物，通过RACE的方法克隆得到了长为1637bp的cDNA全长序列——XN-P450。确定其开放阅读框长1521bp，通过软件对其进行氨基酸、跨膜区、亚细胞定位、二级结构及酶切位点等的预测。结果表明XN-P450编码蛋白质有506个氨基酸，二级结构有53.16%的α螺旋，14.62%的β折叠及32.21%的环，含4个主要的跨膜螺旋；经亚细胞定位... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

五种方法提取淡色库蚊总RNA的琼脂糖凝胶电泳检测Figure2-1AgarosegelelectrophoresisoftotalRNAextractedfromCulexpipienspallensbyfivemethods

求时间比较长而最耗且居中，从节时的角度表 2-3 不同提取方法耗时he time-consuming of diffeTrizol Trizol+ CTAB 1.5 2 sothiocyanate；改良：mod泳结果分析证实为库蚊保守的基因为模板，加以 CYP6F1，该定量引物的目的扩大小在 180bp 处附近，蚊中这一随机的基因反转录以及扩增成功5 4 3 2 1 M

M DNA marker 1 异硫氰酸胍 2 Trizol 3 CTAB+ Trizol 4 Trizol 改良 5 CTAB 改M DNA marker 1 Guanidine isothiocyanate 2 Trizol 3 CTAB+Trizol 4 modified Trizol 5 modified C.2.5 五种方法所提总 RNA 定量分析根据定量 PCR 仪给出的结果（图 2-3）来看，标准曲线的 R2接近于 1，表明释所产生的各梯度线性相关。定量数据显示如表 2-4，β-actin 的表达量在五种 的表现并无明显差异，保持在一个水平； CYP6F1 的表达量则存在着较大的差TAB 改良法最高、Trizol+ CTAB 法次之、接下来是比较接近的 Trizol 法和异硫氰酸rizol 改良法最低，最后能够确定下来的是 CTAB 改良法为总 RNA 提取得率最高


本文编号：3072394