RANK/TRAF-6/NF-κB1通路在氟砷联合染毒成骨与破骨细胞共培养体系中对破骨细胞分化的调控作用
发布时间：2021-03-10 01:41
目的:本研究以氟砷联合染毒成骨与破骨细胞共培养体系为研究对象,以RANK/TRAF-6/NF-κB1信号通路相关基因、蛋白的表达以及对破骨细胞骨吸收功能因子的检测来初步探讨氟、砷致骨相损伤的分子机制。方法:1.用成骨诱导剂诱导后的小鼠颅顶前成骨细胞MC3T3-E1与单核巨噬细胞RAW264.7细胞建立共培养体系,培养7d后,经抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色鉴定破骨细胞。2.细胞活力的检测:在RAW264.7细胞向破骨细胞分化后,用含不同浓度的氟化钠（sodium fluoride,NaF）或亚砷酸钠（sodium arsenite,NaAsO2）的培养基换液染毒,氟剂量为0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mmolF-/L,砷剂量为0.1、0.5、1.0、5.0、10.0、15.0、20.0μmolAs3+/L,分别染毒24h后,用CCK-8法测细胞相对存活率,探讨氟、砷对破骨细胞的毒性。3.剂量组别的设计:根据上述细胞活力检测结果,选择氟和砷的染毒剂量分别为4个剂量组:即氟化钠（NaF）为0、0...
【文章来源】：贵州医科大学贵州省
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
光镜下MC3T3-E1和RAW264.7细胞及诱导后染色结果
则判定为拮抗作用；（氟×砷效应）=氟效应+砷效应则判定为相加作用。并分析交互作用属于何种类型。检验水准α=0.05。2 结 果2.1 氟、砷染毒对共培养体系中成骨与破骨细胞的毒性2.1.1 氟、砷染毒 24 小时 CCK-8 检测染氟组、染砷组的组内差异有统计学意义（F=33.098、F=154.496，P 均<0.05），见图 1。与对照组相比，当 NaF 浓度为 1.6mmol/L、NaAsO2浓度为 4μmol/L时 ，细胞活性明显降低（P 均<0.05），随着浓度进一步增高，细胞活性呈浓度依赖性降低，其活性分别为 75.84%和 81.82%；随着染氟和染砷浓度增加，细胞活性成浓度依赖性降低。考虑联合染毒可能会增加细胞毒性，因此本实验后续研究的（分别以 0、0.1、0.4、1.6 mmol/L NaF 和 0、0.5、2.5、12.5μmol/L NaAsO2等比数列分组）最高浓度为 NaF 1.6mmol/L 和 NaAsO212.5μmol/L 。
图 2-2 氟砷染毒共培养体系中上清液 OPG/RANKL 蛋白比值-2OPG/RANKL protein ratio of supernatant in the co-culture systemfluorine and arsenic表 2-5 OPG、RANKL 蛋白及 mRNA 相对表达量的氟砷交互作用.2-5 Fluorine - arsenic interaction analysis of OPG, RANKL protein expression式OPG 蛋白 RANKL 蛋白 OPG mRNA RAF P F P F P 7.57 0.01*7.38 0.01*126.14 0.00*1719.86 0.00*10.22 0.00*302.90 0.00*3s 4.93 0.00*11.61 0.00*117.49 0.00*1P<0.05。、 砷及氟砷联合对 RANK/TRAF-6/NF-κB1 通路及骨吸收
本文编号：3073834
【文章来源】：贵州医科大学贵州省
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
光镜下MC3T3-E1和RAW264.7细胞及诱导后染色结果
则判定为拮抗作用；（氟×砷效应）=氟效应+砷效应则判定为相加作用。并分析交互作用属于何种类型。检验水准α=0.05。2 结 果2.1 氟、砷染毒对共培养体系中成骨与破骨细胞的毒性2.1.1 氟、砷染毒 24 小时 CCK-8 检测染氟组、染砷组的组内差异有统计学意义（F=33.098、F=154.496，P 均<0.05），见图 1。与对照组相比，当 NaF 浓度为 1.6mmol/L、NaAsO2浓度为 4μmol/L时 ，细胞活性明显降低（P 均<0.05），随着浓度进一步增高，细胞活性呈浓度依赖性降低，其活性分别为 75.84%和 81.82%；随着染氟和染砷浓度增加，细胞活性成浓度依赖性降低。考虑联合染毒可能会增加细胞毒性，因此本实验后续研究的（分别以 0、0.1、0.4、1.6 mmol/L NaF 和 0、0.5、2.5、12.5μmol/L NaAsO2等比数列分组）最高浓度为 NaF 1.6mmol/L 和 NaAsO212.5μmol/L 。
图 2-2 氟砷染毒共培养体系中上清液 OPG/RANKL 蛋白比值-2OPG/RANKL protein ratio of supernatant in the co-culture systemfluorine and arsenic表 2-5 OPG、RANKL 蛋白及 mRNA 相对表达量的氟砷交互作用.2-5 Fluorine - arsenic interaction analysis of OPG, RANKL protein expression式OPG 蛋白 RANKL 蛋白 OPG mRNA RAF P F P F P 7.57 0.01*7.38 0.01*126.14 0.00*1719.86 0.00*10.22 0.00*302.90 0.00*3s 4.93 0.00*11.61 0.00*117.49 0.00*1P<0.05。、 砷及氟砷联合对 RANK/TRAF-6/NF-κB1 通路及骨吸收
本文编号：3073834
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