荔枝水溶性提取蛋白及柑橘Citsh1蛋白促炎效果评价研究

发布时间：2017-04-28 22:13

  本文关键词：荔枝水溶性提取蛋白及柑橘Citsh1蛋白促炎效果评价研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：荔枝和柑橘都是营养丰富,功能成分含量高的园艺果品,具有很好的保健作用,深受消费者的喜爱。但是在生活中我们经常会发现,过多的食用荔枝或部分宽皮柑橘会出现上火的症状,表现为喉咙瘙痒或疼痛、牙龈肿胀、口腔溃疡、甚至是发烧和炎症,这显著地影响着人们的生活质量。本文在本实验室前期工作的基础上,选用荔枝和温州蜜柑这两种水果,利用巨噬细胞和小鼠模型,评价了荔枝粗提物和Citsh1蛋白的促炎效果。荔枝中促炎有效成分的提取、功能验证及鉴定:1.初步建立了荔枝促炎有效成分的提取工艺,从荔枝中分离出纯度较高的水溶性蛋白。具体方法:将荔枝果肉榨汁、过滤、离心并冷冻干燥得到荔枝水溶性提取物(LWE),LWE经透析、冷冻干燥后得到高分子水溶性提取物(HLWE),最后从HLWE中提取蛋白。2.利用巨噬细胞系RAW264.7对蛋白组分(LWP)进行促炎效果评价。发现LWP处理后,细胞中促炎因子IL-1β,i NOS,COX-2和抗炎因子HO-1在转录水平上的表达都显著性上升。3.对LWP进行质谱鉴定,并利用SMART和混合序列比对进行分析,结果显示14-3-3样蛋白GF14λ,14-3-3样蛋白GF14ω和14-3-3样蛋白GF14υ是最可能具有促炎功效的蛋白。重组蛋白r Citsh1.3-3促炎效果的体内评价研究:1.小鼠给药一定周期后,进行血常规检测,结果显示处理组小鼠NE%(嗜中性粒细胞比率)、BA%(嗜碱性粒细胞百分率)比率均有所上升,而LY%(淋巴细胞比率)、PLT(血小板计数)和PCT%(血小板压积)基本成下降趋势。2.对小鼠的结肠和肺部做病理组织切片,结果显示处理组小鼠的结肠以及肺部组织表现出炎症变化。3.对小鼠血清进行检测,结果发现处理组小鼠血清中的炎症因子IL-1α、IL-2、IL-4、IL-6和TNF-α表达几乎都有所升高。
【关键词】：柑橘 荔枝 “上火” 巨噬细胞 小鼠 炎症因子
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R151
【目录】：

• 摘要7-8
• Abstract8-10
• 缩略词表（Abbreviations）10-11
• 第一章 前言11-20
• 1 课题的提出11-13
• 2 上火与炎症的关系13-15
• 3 炎症与炎症因子15-16
• 4 炎症研究模型16-18
• 4.1 巨噬细胞系RAW264.7 炎症模型的建立17-18
• 4.2 C57BL/6 小鼠炎症模型的建立18
• 5 本课题研究内容、目的和意义18-20
• 第二章 荔枝中促炎有效成分的提取、功能验证以及鉴定20-39
• 1 引言20
• 2 材料与方法20-26
• 2.1 实验药品及试剂20-21
• 2.2 荔枝样品的前期处理21
• 2.3 蛋白质的提取与定量21-22
• 2.4 SDS-PAGE电泳22
• 2.5 细胞培养实验22-23
• 2.6 MTT法测定细胞生存能力23-24
• 2.7 细胞总RNA的提取以及反转录24-25
• 2.8 半定量PCR和实时荧光定量PCR分析25
• 2.9 质谱分析25-26
• 2.10 数据分析26
• 3 结果与分析26-36
• 3.1 荔枝中促炎蛋白的提取以及SDS-PAGE分析26-28
• 3.2 体外LWP蛋白的毒理实验28-29
• 3.3 LWP蛋白对炎症介质mRNA表达水平的影响29-32
• 3.4 LWP蛋白质谱鉴定结果32-36
• 4 讨论36-39
• 4.1 荔枝的“上火”、过敏以及炎症探讨36-37
• 4.2 荔枝中促炎物质的提取以及促炎功能研究37
• 4.3 荔枝中“上火”候选蛋白的功能分析37-39
• 第三章 温州蜜柑上火成分的功能验证39-57
• 1 引言39
• 2 材料与方法39-43
• 2.1 实验材料及试剂39
• 2.2 实验材料处理39-40
• 2.3 实验动物分组与给药40
• 2.4 小鼠血常规测定40
• 2.5 小鼠肺和肠道病理组织切片制作40-42
• 2.6 小鼠血清中炎症因子含量测定42-43
• 2.6.1 血清样本的收集与储藏42
• 2.6.2 实验前试剂准备42
• 2.6.3 实验过程42-43
• 2.7 数据分析43
• 3 结果与分析43-54
• 3.1 温州蜜柑汁和rCitsh1.3-3 蛋白对小鼠外观的影响43-44
• 3.2 温州蜜柑汁和rCitsh1.3-3 蛋白的处理对小鼠血常规的影响44-50
• 3.2.1 小鼠血常规中嗜中性粒细胞的变化46-47
• 3.2.2 小鼠血常规中淋巴细胞的变化47
• 3.2.3 小鼠血常规中血小板计数的变化47-49
• 3.2.4 小鼠血常规中血小板压积的变化49
• 3.2.5 小鼠血常规中嗜碱性粒细胞的变化49-50
• 3.3 温州蜜柑汁和rCitsh1.3-3 蛋白对小鼠结肠和肺组织的影响50-52
• 3.3.1 小鼠结肠组织的病理学变化50-51
• 3.3.2 小鼠肺组织的病理学变化51-52
• 3.4 温州蜜柑汁和rCitsh1.3-3 蛋白对小鼠血清中炎症因子的影响52-54
• 4 讨论54-57
• 4.1 柑橘“上火”在人体内的反应54-55
• 4.2 柑橘“上火”在小鼠体内的反应55-57
• 参考文献57-65
• 附录 科研成果65-66
• 致谢66

【引证文献】

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 季群;钟波;闫慧清;杨晓庆;陈逗逗;彭抒昂;程运江;余学峰;童庆伟;马兆成;邓秀新;;温州蜜柑诱导人体免疫炎症反应:一项基于双盲的口腔食物激发试验研究[A];中国园艺学会2014年学术年会论文摘要集[C];2014年

  本文关键词：荔枝水溶性提取蛋白及柑橘Citsh1蛋白促炎效果评价研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：333682