5-脂氧合酶在4-氨基联苯所致HBE细胞氧化应激中的作用

发布时间：2017-05-03 23:01

  本文关键词：5-脂氧合酶在4-氨基联苯所致HBE细胞氧化应激中的作用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：：[目的]研究4-氨基联苯(4-aminobiphenyl,4-ABP)所导致的人支气管上皮细胞氧化应激及氧化损伤过程中5-LOX等氧化代谢酶所起的作用,为4-ABP在肝外组织中的代谢活化及损伤机制研究提供新的思路。[方法]选取人支气管上皮细胞(HBE)为靶细胞,通过MTT实验选择50μM、100μM、200μM三个剂量持续染毒细胞24h后,测定各染毒组ROS、SOD、CAT GSH、T-AOC、MDA水平变化,用Western Blot法检测各染毒组Nrf2蛋白的表达情况。[结果]HBE细胞经不同浓度4-ABP染毒处理后细胞内ROS水平明显升高,100、200μM染毒时ROS水平的升高差异具有统计学意义(p0.05)。抗氧化酶SOD和CAT随着4-ABP染毒剂量的增加呈先升高再降低的趋势,低剂量染毒时SOD活性代偿性增高,中、高剂量(100、200μM)染毒时SOD活力显著意义的降低(p0.05)。CAT活性在低、中剂量(50、100gM)染毒明显升高(p0.05)。4-ABP染毒处理后GSH含量和T-AOC水平显著降低(p0.05),而细胞内脂质过氧化产物MDA的含量显著增加(p0.05)；Nrf2蛋白的表达也增加。5-LOX基因沉默处理和使用5-LOX的特异性抑制剂AA861均可抑制4-ABP所致的HBE细胞氧化应激和氧化损伤,但对Nrf2蛋白无明显影响。CYP4501A的抑制剂α-萘黄酮对4-ABP引起的氧化应激和氧化损伤具有一定的保护作用,并能抑制氧化应激刺激导致的Nrf2蛋白表达增加。而前列腺素合成酶的抑制萘普生则对4-ABP所致的氧化应激和氧化损伤无明显的保护作用。[结论]4-ABP可使HBE细胞ROS水平升高,影响细胞抗氧化系统状态,导致氧化损伤,并呈现明显的剂量效应关系。抑制5-LOX能有效降低4-ABP所致的氧化应激水平和氧化损伤程度,提示5-LOX参与4-ABP的活化,引起氧化应激。P450也在HBE细胞中4-ABP的代谢活化及其导致的氧化应激中起着一定作用。图16幅,表6个,参考文献75篇。
【关键词】：4-氨基联苯 5-脂氧合酶 氧化应激 活性氧
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R114
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 英文缩略表9-10
• 1 前言10-14
• 2 材料与方法14-25
• 2.1 材料与仪器14-16
• 2.1.1 材料14-15
• 2.1.2 主要仪器和设备15
• 2.1.3 主要试剂的配制15-16
• 2.2 方法16-24
• 2.2.1 细胞培养16
• 2.2.2 细胞染毒16-17
• 2.2.3 细胞收获17
• 2.2.4 细胞内总蛋白的提取17
• 2.2.5 蛋白浓度测定17
• 2.2.6 MTT实验17-18
• 2.2.7 细胞内活性氧测定18
• 2.2.8 4-ABP染毒后细胞内抗氧化系统状态的检测—SOD、CAT、GSH、T-AOC活力测定18-22
• 2.2.9 细胞内丙二醛的测定22-23
• 2.2.10 氧化应激相关蛋白—Nrf2蛋白的表达测定23-24
• 2.3 统计分析24-25
• 3 实验结果25-37
• 3.1 4-氨基联苯对HBE细胞存活率的影响25
• 3.2 5-LOX对4-ABP染毒后细胞内ROS水平的影响25-27
• 3.3 脂氧合酶等对.4-ABP导致的抗氧化系统变化的影响27-33
• 3.3.1 5-LOX对4-ABP染毒后HBE细胞SOD活性的影响27-28
• 3.3.2 5-LOX对4-ABP染毒后细胞内CAT活力的影响28-30
• 3.3.3 5-LOX对4-ABP染毒处理HBE细胞GSH含量的影响30-31
• 3.3.4 5-LOX对4-ABP染毒后HBE细胞总抗氧化能力影响31-33
• 3.4 5-LOX对4-ABP染毒后HBE细胞MDA含量影响33-34
• 3.5 各组细胞4-ABP染毒后Nrf2蛋白表达水平测定34-37
• 4 讨论37-45
• 4.1 5-LOX对4-ABP作用后HBE细胞内ROS水平的影响38-39
• 4.2 5-LOX对4-ABP处理后细胞抗氧化系统的影响39-42
• 4.2.1 5-LOX在4-ABP处理后细胞内抗氧化酶活性变化中的作用39-41
• 4.2.2 非酶的抗氧化剂谷胱甘肽变化41-42
• 4.3 5-LOX对4-ABP作用后总抗氧化能力的影响42
• 4.4 5-LOX对4-ABP染毒后HBE细胞MDA含量的影响42-43
• 4.5 4-ABP染毒后Nrf2表达水平的变化43-45
• 5 结论45-47
• 参考文献47-53
• 综述53-65
• 参考文献59-65
• 攻读学位期间主要研究成果65-66
• 致谢66

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 朱宏翔;胡建安;黄云;武越;熊敏如;;人支气管上皮细胞5-脂氧合酶介导4-氨基联苯的活化及DNA损伤[J];中国药理学与毒理学杂志;2011年02期

2 胡建安,武越,Aron P.Kulkarni;脂氧合酶介导酚噻嗪类对联苯胺等氧化的增强作用[J];中华劳动卫生职业病杂志;2004年03期

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本文编号：343885