酶法制备乳清蛋白肽及其对衰老小鼠学习记忆能力的影响

发布时间：2017-05-04 08:00

  本文关键词：酶法制备乳清蛋白肽及其对衰老小鼠学习记忆能力的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：乳清是工业生产干酪及干酪素的副产品,其主要成分为乳清蛋白。利用酶解技术水解乳清蛋白可得到的低分子量的乳清蛋白肽,这些肽段具有多种生理功能,对于疾病预防和天然保健品的开发和利用具有重要意义。本实验利用酶法制备乳清蛋白肽,并对其进行分离纯化鉴定,筛选出抗氧化活性最高的组分进行动物行为学实验和体内生理生化指标测定,探究乳清蛋白抗氧化肽对衰老小鼠学习记忆能力的影响。 本实验以浓缩乳清蛋白(WPC80)为原料,选择碱性蛋白酶为实验酶,以水解度和DPPH自由基清除率为指标,对水解条件进行优化,考察各种因素对水解效果的影响,得到最佳的水解工艺为：加酶量5000U/g, pH8.5,温度60℃,底物浓度5%,水解时间2h,在此条件下水解,水解度为19.32%,水解物的DPPH自由基清除率为53.57%。 采用DA201-C大孔树脂对乳清蛋白肽进行脱盐处理,以达到初步分离纯化的目的。首先考察解吸剂、上样流速和上样浓度对脱盐效果的影响,结果表明,70%乙醇为解吸剂,最佳上样流速为1.5mL/min,最佳上样浓度为30mg/mL,在此条件下进行动态脱盐效果最好,脱盐后,脱盐率为96.81%,回收率为90.37%,且DPPH自由基清除率明显增大,抗氧化活性增强。 利用截留分子量不同的超滤膜将乳清蛋白肽分离成三个组分,Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定各个组分乳清蛋白肽的分子量,结果发现,超滤分离效果良好,且分子量小于3KDa的多肽抗氧化活性最强。 利用行为学方法研究乳清蛋白肽对衰老小鼠被动回避和空间学习记忆能力的影响。以自然衰老小鼠为衰老模型,青年小鼠为空白对照,脑复康为阳性对照,实验结果表明,用乳清蛋白肽灌胃之后,衰老小鼠的跳台潜伏期增加,跳台错误次数减少,在避暗箱中的电击时间和电击次数减少,在水迷宫定位航行实验中的逃避潜伏期、游泳路程、游泳速度和朝向角减小,空间探索实验中的目标象限停留时间、目标象限停留时间百分比、目标象限停留路程百分比、经过平台次数增加,初次穿越平台的时间减小,同时游泳轨迹也向趋向型和直线型发展。可见乳清蛋白肽能够增强衰老小鼠的行为学能力。 在体内动物实验中,以血清、肝脏和脑中SOD、MDA、GSH-Px、蛋白质羰基和AChE为指标,考察乳清蛋白抗氧化肽对衰老小鼠的保护作用。实验结果表明,乳清蛋白肽灌胃之后,衰老小鼠的SOD和GSH-Px活性明显增加,MDA和蛋白质羰基含量明显降低,高剂量组与脑复康对照组结果相近；同时AChE的活性也有所降低。由此可见,乳清蛋白肽能够延缓机体衰老,调节中枢胆碱能神经系统的活动,从而改善衰老小鼠的学习记忆能力。
【关键词】：乳清蛋白肽 酶解 分离鉴定 抗衰老 学习记忆能力
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：TS252.9;R151
【目录】：

• 摘要10-11
• Abstract11-13
• 1 前言13-22
• 1.1 乳清蛋白概述13
• 1.2 乳源生物活性肽的研究13-17
• 1.2.1 乳清蛋白生物活性肽的序列及功能13-15
• 1.2.2 乳清蛋白肽的制备方法15
• 1.2.3 乳清蛋白肽的分离纯化方法15-16
• 1.2.4 乳清蛋白源抗氧化肽的发展16
• 1.2.5 抗氧化活性的评价方法16-17
• 1.3 衰老与学习记忆的关系17-20
• 1.3.1 衰老对学习记忆能力的影响17-18
• 1.3.2 衰老模型的选择18
• 1.3.3 学习记忆能力的行为学评价方法18-19
• 1.3.4 通过抗氧化改善学习记忆力的天然活性物质19-20
• 1.4 课题研究目的意义及主要研究内容20-22
• 1.4.1 课题的研究目的意义20-21
• 1.4.2 课题的研究内容21-22
• 2 材料与方法22-36
• 2.1 实验材料22-23
• 2.1.1 实验原料22
• 2.1.2 主要试剂22-23
• 2.2 主要仪器23
• 2.3 实验方法23-36
• 2.3.1 原料成分的含量测定23-24
• 2.3.2 蛋白酶的筛选24
• 2.3.3 水解度(DH)的测定24-25
• 2.3.4 乳清蛋白水解物DPPH自由基清除能力的测定25
• 2.3.5 乳清蛋白的酶解工艺流程25
• 2.3.6 乳清蛋白的酶解工艺条件优化25-26
• 2.3.7 乳清蛋白肽的脱盐26-27
• 2.3.8 超滤法分离乳清蛋白肽27
• 2.3.9 Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳27-28
• 2.3.10 动物行为学实验研究28-29
• 2.3.11 乳清蛋白肽体内作用实验29-35
• 2.3.12 统计分析35-36
• 3 结果与分析36-54
• 3.1 原料主要成分含量的测定36
• 3.2 水解酶的筛选36-37
• 3.2.1 蛋白酶活力的测定36-37
• 3.2.2 不同酶水解效果的比较37
• 3.3 水解度测定中标准曲线的测定37-38
• 3.4 乳清蛋白的酶解工艺条件优化38-41
• 3.4.1 加酶量和pH对乳清蛋白水解度的影响38
• 3.4.2 加酶量和pH对乳清蛋白酶解物DPPH自由基清除能力影响38-39
• 3.4.3 底物浓度和温度对乳清蛋白水解度的影响39
• 3.4.4 底物浓度和温度对乳清蛋白酶解物DPPH自由基清除能力的39-40
• 3.4.5 水解时间对水解度和DPPH自由基清除率的影响40-41
• 3.5 乳清蛋白肽的脱盐效果41-44
• 3.5.1 DA201-C大孔树脂对乳清蛋白肽的静态吸附及解吸41-42
• 3.5.2 最佳上样流速和上样浓度的选择42
• 3.5.3 DA201-C大孔树脂对乳清蛋白肽动态吸附及解吸42-43
• 3.5.4 DA201-C大孔树脂对乳清蛋白肽的脱盐效果分析43-44
• 3.6 超滤法分离抗氧化肽44
• 3.7 Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳44-45
• 3.8 乳清蛋白肽对动物行为学能力的影响45-49
• 3.8.1 跳台实验测试结果45
• 3.8.2 避暗实验测试结果45-46
• 3.8.3 水迷宫实验测试结果46-49
• 3.9 乳清蛋白肽对衰老小鼠体内SOD、MDA、GSH-Px、蛋白质羰基和AChE影响49-54
• 3.9.1 乳清蛋白肽对小鼠脏体比的影响49
• 3.9.2 乳清蛋白肽对小鼠血清、肝脏和脑内SOD活性的影响49-50
• 3.9.3 乳清蛋白肽对小鼠血清、肝脏和脑内MDA含量的影响50-51
• 3.9.4 乳清蛋白肽对小鼠血清、肝脏和脑内GSH-PX活性的影响51-52
• 3.9.5 乳清蛋白肽对小鼠血清、肝脏和脑内蛋白羰基含量的影响52
• 3.9.6 乳清蛋白肽对小鼠脑内AChE的影响52-54
• 4 讨论54-57
• 4.1 DA201-C大孔树脂对乳清蛋白肽脱盐的影响54
• 4.2 Tricine-SDS-PAGE电泳对小分子肽分离鉴定的影响54-55
• 4.3 乳清蛋白肽对小鼠行为学能力的影响55
• 4.4 乳清蛋白肽对小鼠体内抗氧化系统的影响55-56
• 4.5 乳清蛋白肽对小鼠胆碱能系统的影响56-57
• 5 结论57-58
• 致谢58-59
• 参考文献59-65
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文65

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 魏小龙,张永祥;老年性痴呆发病机理研究进展[J];军事医学科学院院刊;1999年01期

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3 杨国玲，文永均，胡晓愚，佘世望;胸腺相关肽及其自旋标记类似物的抗氧化活性研究[J];生物化学与生物物理学报;1995年06期

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本文编号：344649