围产期氟暴露对仔鼠学习记忆及海马中miR-124与miR-132表达的影响

发布时间：2017-05-07 18:11

  本文关键词：围产期氟暴露对仔鼠学习记忆及海马中miR-124与miR-132表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：[目的]氟是一种环境毒物,它不仅对骨骼和牙齿有害,而且它还具有神经毒性,表现之一就是对学习记忆的有影响。随着研究的深入,人们对氟暴露群体后代智商的研究越来越重视,miRNA参与调节了中枢神经系统的发育和活动,包括神经突触可塑性、神经细胞的分化等,这些活动都与认知功能密切相关。但氟对学习记忆的影响是否与miRNA有关还不清楚,本研究欲探讨母鼠围产期氟暴露后,是否引起仔鼠自发行为、学习记忆能力以及焦虑行为的改变,且是否伴随了miRNA及其靶基因的变化,拟从转录后水平探讨氟的神经毒性机制,为氟中毒的预防和治疗提供依据。[方法]健康性成熟的ICR小鼠进行一周的适应性饲养后,雌雄合笼(雌：雄为2：1),次日早晨检查雌鼠阴道,查到阴道栓的当天定为怀孕第0天(gestation day 0,GDO)。怀孕雌鼠随机分为4组,分别为对照组(C组,去离子水)、低氟组(L组,25mg/LNaF)、中氟组(M组,50mg/L NaF)、高氟组(H组,100mg/NaF),每组怀孕母鼠6只。母鼠怀孕第7天通过饮水摄氟,仔鼠出生后第21天(PND 21)终止摄氟。仔鼠出生后第21天(PND 21)每组随机选取12只仔鼠脱颈椎处死,取组织备用;12只仔鼠进行行为学检测。采用开场试验和八臂迷宫检测仔鼠学习记忆能力,采用组织切片、HE染色,荧光定量PCR等技术手段检测仔鼠海马脑组织形态、学习记忆相关miRNA和mRNA的表达量,探讨氟的神经毒性机制。[结果]1仔鼠体重结果：与对照组比,母鼠围产期氟暴露显著降低了仔鼠出生后第3、6、9、12、15、18、21天仔鼠体重。2仔鼠股骨氟含量测定结果：与对照组相比,围产期氟暴露显著升高了仔鼠股骨中氟含量。3海马病理切片HE染色结果：对照组仔鼠海马区形态结构清晰完整,分区明显,细胞核为圆形或椭圆形,着色均匀,细胞形态规则,排列紧密,数目较多;低氟组基本无明显病变;中氟组和高氟组神经细胞总数减少,细胞核变小且形态不规则,细胞边缘不明显。4行为学检测结果：旷场实验中,与对照组相比,氟暴露仔鼠进入中心区的次数呈下降趋势,且高氟组进入中心区的次数显著减少。八臂迷宫实验中,与对照组相比,高氟组增加了参考记忆错误、工作记忆错误和总进臂次数,说明围产期氟暴露仔鼠损害了学习记忆能力。5仔鼠海马中miRNA检测结果：高氟组仔鼠海马中miR-124和miR-132表达量显著升高。6仔鼠海马中mRNA检测结果：高氟组DGCR8的表达量较对照组显著上升，Mecp2和色氨酸羟化酶-2表达量显著下降,其中中氟组和高氟组海马色氨酸羟化酶-2表达量极显著的减少;中氟组和高氟组海马Mecp2的表达量显著低于对照组,其中中氟组差异极显著。处理组海马组织中CREB含量显著低于对照组。其余两个基因dicer和BDNF没有变化。谷氨酸受体基因表达量中,AMPA1、AMPA2和mGluR2表达量显著低于对照组,其中AMPA1和mGluR2的中氟组显著低于对照组,AMPA2的高氟组显著下降。另外三个基因mGluR5、NMDAR2A和NMDAR2B没有变化。[结论]围产期氟暴露可损伤仔鼠的学习记忆能力,其分子机制可能与海马中miR-124和miR-132、谷氨酸受体、CREB等基因的表达受到影响有关。
【关键词】：氟 围产期 海马 学习记忆
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R114
【目录】：

• 摘要6-8
• 前言8-11
• 1 材料与方法11-22
• 1.1 试验材料11-13
• 1.1.1 动物模型的建立11
• 1.1.2 主要试剂11-12
• 1.1.3 主要仪器12-13
• 1.2 试验方法13-22
• 1.2.1 小鼠生长性能的测定13
• 1.2.2 样品采集和处理13
• 1.2.3 仔鼠股骨中氟含量测定13-14
• 1.2.4 仔鼠海马组织形态学观察14
• 1.2.5 旷场实验(Open fields test,OFT)14-15
• 1.2.6 八臂迷宫(Radial-arm maze)15-16
• 1.2.7 仔鼠海马中总RNA的提取16-17
• 1.2.8 引物的设计17-18
• 1.2.9 实时荧光定量PCR反应体系的建立18-22
• 1.3 数据统计22
• 2 实验结果22-28
• 2.1 小鼠生长状态观察22
• 2.2 围产期氟暴露对仔鼠体重的影响22-23
• 2.3 围产期氟暴露对仔鼠股骨中氟含量的影响23
• 2.4 仔鼠海马组织病理切片观察23-24
• 2.5 围产期氟暴露对仔鼠行为学的影响24-26
• 2.5.1 旷场实验(Open field test)24
• 2.5.2 八臂迷宫(Radial-arm maze)24-26
• 2.6 围产期氟暴露对仔鼠海马miRNA-124与miRNA-132的影响26
• 2.7 围产期氟暴露对仔鼠海马中学习记忆相关mRNA的影响26-28
• 3 讨论28-33
• 3.1 动物模型的建立28
• 3.2 围产期氟暴露对仔鼠体重的影响28
• 3.3 围产期氟暴露对仔鼠股骨浓度的影响28-29
• 3.4 围产期氟暴露对仔鼠海马组织形态的影响29
• 3.5 围产期氟暴露对仔鼠旷场实验的影响29
• 3.6 围产期氟暴露对仔鼠学习记忆的影响29-30
• 3.7 围产期氟暴露对仔鼠海马miRNA-124和miRNA-132的影响30-31
• 3.8 围产期氟暴露对仔鼠海马中学习记忆相关mRNA的影响31-33
• 4 结论33-34
• 英文缩略词表34-35
• 参考文献35-40
• Abstract40-42
• 致谢42

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本文编号：350347