青春期BDE-209与DEHP联合染毒对雄性小鼠生殖与内分泌的干扰作用

发布时间：2017-05-10 07:06

  本文关键词：青春期BDE-209与DEHP联合染毒对雄性小鼠生殖与内分泌的干扰作用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的探讨青春期十溴联苯醚(BDE-209)和邻苯二甲酸二(2-乙基)酯(DEHP)联合暴露致雄性ICR小鼠生殖损伤的作用;初步探讨青春期BDE-209和DEHP联合暴露下调雄性ICR小鼠睾丸睾酮合成酶致生殖损伤的机制。方法取健康4周龄雄性ICR小鼠60只,体重18-22g之间,适应性饲养一周后,随机分为5组:A玉米油溶剂对照、B 100mg/kg/d PBDE-209+100mg/kg/d DEHP、C 100mg/kg/d PBDE-209+300mg/kg/d DEHP、D 300mg/kg/d PBDE-209+100mg/kg/d DEHP、E 300mg/kg/d PBDE-209+300mg/kg/d DEHP。小鼠自由采食和饮水,室温控制在25℃左右,湿度50%±10%,明暗交替周期为12h/12h。每周染毒六次,连续染毒6周,染毒结束后眼球取血,脱颈椎处死小鼠,冰浴下分离各脏器并称重,置于-80℃冰箱保存。称量小鼠睾丸、心脏、海马、肝脏、肾脏、体重,并进行精子计数;放射免疫法检测小鼠血清中睾酮浓度;睾丸组织进行HE染色,观察常规病理改变;附睾组织进行电镜观察,观察附睾超微结构改变;免疫荧光实验观察StAR蛋白在睾丸中的定位及表达;Western Blot检测小鼠睾丸中StAR、P450scc、17β-HSD和PKA蛋白表达水平。结果一般毒性:在a玉米油溶剂对照、b100mg/kg/dpbde-209+100mg/kg/ddehp、c100mg/kg/dpbde-209+300mg/kg/ddehp、d300mg/kg/dpbde-209+100mg/kg/ddehp、e300mg/kg/dpbde-209+300mg/kg/ddehp暴露水平下,未对动物的生长发育产生明显的影响,除300mg/kg/dpbde-209+300mg/kg/ddehp剂量小鼠的睾丸脏器系数(0.3001±0.0771)%减小,与对照组(0.3774±0.0395)%相比差异有统计学意义外,其余剂量组所有脏器系数均未发生显著变化。血清睾酮水平:bde-209与dehp联合暴露,能够降低小鼠血清睾酮的水平。各组小鼠血清睾酮的浓度经对数转换后,依次为:a(2.89±0.57),b(2.59±0.63),c(2.68±0.16),d(2.14±0.84),e(2.06±0.67)。与对照组a相比,d组和e组的血清睾酮浓度显著降低,差异有统计学意义(p0.05)。精子计数:bde-209与dehp联合染毒,能够降低小鼠附睾尾部精子计数,各组小鼠附睾精子计数(×106/ml)分别为a(57.25±10.08),b(43.18±13.55),c(35.33±9.45),d(31.87±11.69),e(19.67±2.08),与对照组相比,各联合染毒组精子数减少,差异均有统计学意义(p0.05)。睾丸形态学:光镜下,对照组睾丸生精小管连接紧密,基膜连续完整,各级生精细胞形态正常,排列规则,层数较多。间质细胞和支持细胞形态正常,排列紧密,管腔内精子数较多且分布均匀;bde-209与dehp联合染毒能够减少生精细胞层数,生精小管管径减小,基膜断裂,支持细胞和间质细胞数量减少,使生精细胞排列紊乱,降低管腔精子数量。附睾超微结构:电镜下,对照组a附睾管壁基细胞结构完整,精子结构清晰正常,线粒体均匀分布于中央“9+2”结构的纤维柱周围;bde-209与dehp联合染毒能够使精子头部出现畸形,尾部异常,“9+2”纤维柱结构破坏不完整,管壁出现纤维化,微绒毛排列紊乱,顶体双层膜结构消融,附睾管管壁出现空泡。睾酮合成酶:免疫荧光实验发现,与对照组相比,bde-209与dehp联合染毒间质细胞中star、p450scc蛋白表达减少。免疫印迹实验结果显示,与对照组相比,bde-209与dehp联合染毒能够下调类固醇生成急性调节蛋白star(b、c、d、e组,p0.05)、胆固醇侧链裂解酶p450scc(c、d、e组,p0.05)和17β-hsd羟基类固醇脱氢酶17β-hsd(c、d、e组,p0.05)。7、蛋白激酶a(pka)结果的激活:与对照组相比,BDE-209与DEHP联合染毒能够上调PKA的表达(E组,P0.05)。结论十溴联苯醚与邻苯二甲酸二(2-乙基)酯联合暴露对青春期雄性ICR小鼠具有生殖毒性,破坏睾丸和附睾结构,减少血清睾酮水平和精子数,能够降低小鼠睾丸中睾酮合成酶相关蛋白的表达;睾酮合成酶下调致睾酮的合成与分泌减少在BDE-209与DEHP联合染毒致雄性生殖损伤中发挥作用。
【关键词】：十溴联苯醚 邻苯二甲酸二(2-乙基)酯 生殖毒性 睾酮合成酶
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R114
【目录】：

• 英文缩略词表5-6
• 摘要6-8
• abstract8-11
• 1 前言11-14
• 2 材料与方法14-27
• 3 结果27-42
• 4 讨论42-45
• 5 结论45-46
• 参考文献46-51
• 附录51-52
• 致谢52-53
• 综述53-61
• 参考文献58-61

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本文编号：354240