大气PM2.5对小鼠树突状细胞毒性作用的研究

发布时间：2017-05-23 12:19

  本文关键词：大气PM2.5对小鼠树突状细胞毒性作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:观察大气PM2.5不同浓度下对BALB/c小鼠骨髓来源树突状细胞(Dendritic cells,DC)的毒性作用。方法:1.大气PM2.5收集:2014年1月-2014年2月期间,收集山西省太原市相对污染区和相对洁净区的PM2.5滤膜。将PM2.5制成冻干粉。临用前紫外灯照射冻干粉30分钟,用含10%胎牛血清的RPMl l640细胞培养液溶解PM2.5冻干粉,配成50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml浓度的颗粒悬液。2.体外诱导培养小鼠树突状细胞(DCs):在无菌条件下提取BALB/c小鼠骨髓细胞,分离单个核细胞,以小鼠重组粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)20ng/ml和白细胞介素(IL-4)2ng/ml协同诱导下培养一周,倒置显微镜下观察DC的形态变化、免疫荧光细胞化学染色观察树突状细胞表型特点。3.将活性良好的树突状细胞接种在12孔板中,每孔细胞数1×104。细胞分为6组,对照组用含10%胎牛血清的RPMl l640细胞培养液,其余5组用上述含不同浓度PM2.5的含10%胎牛血清的RPMl l640细胞培养液培养树突状细胞24小时,收集细胞。用MTS法观察树突状细胞存活率。4.细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性分析,判断PM2.5对树突状细胞的损害程度。5.将活性良好的树突状细胞接种在12孔板中,每孔细胞数1×104。细胞组分为4组,分别为对照组control组、铁胺甲磺酸酯(Deferoxamine mesylate,DFO)组、DFO+PM2.5组、PM2.5组。分别培养树突状细胞24小时,MTS法观察细胞生存率,以判断PM2.5混合成分中是否含有金属离子?6.DAPI/PI双染树突状细胞,荧光显微镜下观察树突状细胞的存活/死亡比例。结果:1.成功获取小鼠骨髓单个核细胞,培养树突状细胞活性良好。2.不同浓度PM2.5对DC存活率的影响:以对照组存活率做对照,PM2.5浓度为50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml各组DC存活率分别为88.10%、81.45%、71.48%、43.65%、21.82%,各组间较对照组差异有统计学意义。3.LDH活性分析:PM2.5浓度为50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml各组LDH释放量分别为5.5%、14.8%、27%、78%、89%。LDH释放与PM2.5浓度呈现剂量依赖性关系。4.Control组、DFO组、DFO+PM2.5组、PM2.5组,以Control组做对照,其余各组分别为:95.41%、75.84%、22.38%。5.DAPI/PI双染DC,荧光显微镜下观察活细胞生存率、凋亡率、死亡率:PM2.5组与Control组、DFO组、DFO+PM2.5组之间均有显著差异。结论:PM2.5对骨髓来源的树突状细胞有毒性作用,随着剂量的增加,毒性增加。PM2.5成分复杂,对骨髓来源的树突状细胞的毒性作用不仅来源于可溶于水相的物质,金属离子也发挥重要作用。
【关键词】：PM2.5 树突状细胞 毒性作用
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：X513;R122
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 常用缩写词中英文对照表10-11
• 前言11-13
• 1 实验材料与方法13-16
• 1.1 实验材料13
• 1.2 实验方法13-15
• 1.3 统计学处理15-16
• 2 结果16-20
• 2.1 成功获取细胞16
• 2.2 不同浓度PM2.5 对树突状细胞存活率的影响16
• 2.3 LDH活性分析16
• 2.4 金属成份对细胞影响16-17
• 2.5 DAPI/PI双染树突状细胞17-20
• 3 讨论20-22
• 4 结论22-23
• 参考文献23-25
• 综述25-34
• 参考文献30-34
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果34-35
• 致谢35-36
• 个人简历36

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 谢华林,张萍,贺惠,蒋宏伟;大气颗粒物中重金属元素在不同粒径上的形态分布[J];环境工程;2002年06期

2 陈冬梅;苑红宇;;PM_(2.5)对人体呼吸系统及心血管系统影响的研究[J];沈阳医学院学报;2014年01期

3 朱诗语;王春凤;杨桂连;;树突状细胞在病毒感染动物免疫应答中的作用[J];畜牧与兽医;2014年12期

4 Giovanni Tarantino;Domenico Capone;Carmine Finelli;;Exposure to ambient air particulate matter and non-alcoholic fatty liver disease[J];World Journal of Gastroenterology;2013年25期

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本文编号：387943