淡色库蚊抗氯氰菊酯机理及防治研究

发布时间：2017-05-25 02:10

  本文关键词：淡色库蚊抗氯氰菊酯机理及防治研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：淡色库蚊(Culex pipiens pallens)是我国骚扰性家栖优势蚊种,主要分布在中国的中东部和北部地区,是乙型脑炎、班氏丝虫病和西尼罗病毒的传病媒介。目前控制蚊子危害主要依赖于化学合成杀虫剂,其中以拟除虫菊酯类杀虫剂广泛使用的杀虫剂,但是它们的大量使用,使许多害虫陆续产生了抗药性,并逐渐出现交互抗性、多重抗性,甚至出现联合抗性,深入研究抗性的分子和生理生化机理对于建立高敏感的抗性检测方法和制定综合防治措施具有重要意义。本研究的主要内容包括以下五个方面:对本实验室饲养的淡色库蚊幼虫和成蚊的抗性测定;对淡色库蚊Na+通道不同结构域片段ⅠS6、ⅡS4-S6、ⅡS全长片段和ⅢS6的基因克隆;比较不同龄期与性别的蚊虫体内羧酸酯酶(Car E)、谷胱甘肽转移酶(GSTs)、O-脱甲基酶和乙酰胆碱酯酶(ACh E)的酶活力测定;最后通过氯氰菊酯和溴虫腈的单剂,以及与PBO复配来测定对淡色库蚊的生物防治效果。对淡色库蚊的幼虫和成蚊的生物测试中,处理24h后,CR品系幼虫和成蚊点滴及接触筒的抗性系数分别为376.79、22.98和62.73,呈显著性差异,已达到较高的抗药性水平。通过查找相关序列设计击倒抗性(kdr)引物,成功克隆除了Na?通道不同结构域的基因片段,分别为333bp的ⅠS6基因片段、371bp的ⅡS4-6基因片段、701bp的ⅡS基因片段和666bp的ⅢS6基因片段。按照推定的氨基酸差异只在ⅡS4-S6和ⅢS6,ⅠS6并无氨基酸的差异,其中ⅡS4-S6是已发现的突变位点,并与蚊虫抗药性有关,但在ⅢS6并没有报道存在本实验克隆的突变位点,该位点是否与抗药性有关以及相关性情况如何还需进一步进行功能方面的深入细致的研究。无论是CR品系还是SS品系,随着龄期的增长,蛋白质含量升高,在蛹期蛋白质含量为最高,为13.22μg/μl和14.17μg/μl。两种品系的蛋白质含量在幼虫和蛹期无差异,成蚊有差异,CR品系均高于SS品系,且雌成蚊均高于雄成蚊。对蚊虫的酶活力测定,在幼虫期,Car E和O-脱甲基酶的比活力,CR品系高于SS品系;在蛹期,Car E、O-脱甲基酶和GSTs的比活力,CR品系显著高于SS品系;在雌成蚊中,这3种酶CR品系均高于SS品系,另外还发现ACh E也有差异;在雄成蚊中,也发现O-脱甲基酶和GSTs比活力差异显著。龄期不同,每种品系的酶活力有差异,分化的性别不同,也呈现了某些酶活力的差异。对淡色库蚊幼虫和成蚊具有亚致死剂量的增效醚(PBO)浓度,其结果选择的幼虫幼虫浸渍法的增效醚浓度为100ppm、成蚊点滴法为0.2%和WHO接触筒法为10%。氯氰菊酯与PBO复配的对淡色库蚊SS品系和CR品系的幼虫的增效呈显著性差异,24h的增效系数为6.97和115.32,成蚊点滴法的为3.62和18.26,WHO接触筒法的为3.94和443.64。溴虫腈是一种慢效低毒的杀虫剂,观察时间大约在72h。作为单剂使用时,对两种品系的药效相当,处理72h后,幼虫的抗性系数为1.2,成蚊点滴法为1.23,成蚊接触筒法为1.33,无统计差异。氯氰菊酯与具有亚致死剂量的PBO复配时,SS品系和CR品系幼虫24h后的的增效系数为6.97和115.32,成蚊点滴法的为3.62和18.26,成蚊WHO接触筒法的为3.94和443.64,增效作用均呈显著性差异,表明PBO对氯氰菊酯具有明显的增效作用。溴虫腈与PBO复配后,幼虫和成蚊均出现拮抗作用,表明溴虫腈与氯氰菊酯对淡色库蚊无交互抗性,显示了对抗氯氰菊酯淡色库蚊较好的防治效果。将氯氰菊酯与溴虫腈复配,测定复配试剂对淡色库蚊的共毒力,0.5ppm的氯氰菊酯与0.01ppm和0.02ppm的溴虫腈复配,淡色库蚊CR品系出现拮抗作用,因此可以通过不同类型杀虫剂复配或复配增效剂,从而控制疾病载体的蚊虫的防治。
【关键词】：淡色库蚊 氯氰菊酯 增效醚 击倒抗性 酶活力 溴虫腈
【学位授予单位】：上海师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R184.31
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 综述11-18
• 1.1 淡色库蚊的生物学特点11-12
• 1.2 抗药性机理12-15
• 1.3 抗药性防治15-16
• 1.4 研究的目的意义和内容16-18
• 第2章 淡色库蚊抗氯氰菊酯水平的生物测定18-24
• 2.1 引言18
• 2.2 实验材料与试剂仪器18
• 2.3 实验方法18-19
• 2.4 实验结果与分析19-22
• 2.5 结论22-24
• 第3章 淡色库蚊的Na~+通道不同结构域的基因片段的克隆24-37
• 3.1 引言24-25
• 3.2 实验材料与试剂仪器25-27
• 3.3 实验方法27-32
• 3.3.1 淡色库蚊总RNA的提取27
• 3.3.2 反转录为c DNA27-28
• 3.3.3 Na+通道结构域ⅠS6片段、ⅡS4-S6片段、ⅡS全长片段和ⅢS6片段的基因克隆28-32
• 3.4 实验结果与分析32-35
• 3.5 结论35-37
• 第4章 淡色库蚊体内水解酶活性的测定37-51
• 4.1 引言37
• 4.2 实验材料与试剂仪器37-39
• 4.3 实验方法39-44
• 4.3.1 蛋白质标准曲线制作39-40
• 4.3.2 淡色库蚊4龄幼虫、蛹、雌成蚊和雄成蚊蛋白含量的测定40
• 4.3.3 不同龄期与性别的淡色库蚊Car E活力测定40-41
• 4.3.4 不同龄期与性别的淡色库蚊GSTs活力测定41-42
• 4.3.5 不同龄期与性别的淡色库蚊O-脱甲基酶活力测定42-43
• 4.3.6 不同龄期与性别的淡色库蚊ACh E活力测定43-44
• 4.4 实验结果与分析44-49
• 4.5 结论49-51
• 第5章 氯氰菊酯抗性淡色库蚊的防治研究51-59
• 5.1 引言51
• 5.2 实验试剂51
• 5.3 实验方法51-53
• 5.3.1 PBO浓度选择51-52
• 5.3.2 氯氰菊酯与PBO复配对淡色库蚊的防治效果52
• 5.3.3 溴虫腈单剂对淡色库蚊的防治效果52
• 5.3.4 溴虫腈与PBO复配对淡色库蚊的防治效果52
• 5.3.5 溴虫腈与氯氰菊酯复配对淡色库蚊的防治效果52-53
• 5.4 实验结果与分析53-57
• 5.5 结论57-59
• 第6章 结论与展望59-61
• 6.1 通过研究得出的结论59-60
• 6.2 展望60-61
• 参考文献61-65
• 攻读学位期间取得的研究成果65-66
• 致谢66

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

1 艾国民;王庆敏;邹东云;高希武;李富根;;高效液相色谱法测定家蝇细胞色素P450O-脱甲基活性[J];分析化学;2009年08期

2 华小梅;单正军;;我国农药的生产,使用状况及其污染环境因子分析[J];环境科学进展;1996年02期

3 唐振华,袁建忠,庄佩君,陶黎明;昆虫钠通道的结构和与击倒抗性有关的基因突变[J];昆虫学报;2004年06期

4 曲明静;许新军;韩召军;姜晓静;;昆虫乙酰胆碱酯酶基因变异抗药性机制研究[J];昆虫知识;2007年02期

5 乔惠丽;洪冲;文祯中;阚云超;毕利军;;昆虫抗药性分子机制[J];南阳师范学院学报;2007年09期

6 陈辉华;陈晓光;;蚊虫防治技术新进展[J];中国热带医学;2007年10期

7 陆宝麟;媒介蚊虫化学防治的思考[J];中华卫生杀虫药械;2002年01期

8 海秀平;尚文旭;战志胜;;淡色库蚊自育性的研究[J];医学动物防制;2007年11期

9 王新国,王怀位,甄天民,孙传红,李士根,刘凤梅,谭文彬;淡色库蚊抗性治理对策的初步研究[J];中国寄生虫病防治杂志;2003年04期

  本文关键词：淡色库蚊抗氯氰菊酯机理及防治研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：392492