无机砷对J774A.1巨噬细胞自噬-溶酶体途径及其上游调控因子TFEB的影响

发布时间：2024-05-25 06:53

　　目的:巨噬细胞是机体固有免疫反应系统中的重要组成成分之一,而细胞自噬可能会影响巨噬细胞的正常吞噬功能和细胞因子分泌。本研究以J774A.1小鼠巨噬细胞为研究对象,通过体外亚砷酸钠染毒,观察和探究无机砷对巨噬细胞自噬—溶酶体途径及其上游调控因子TFEB的可能影响。研究方法:1、采用MTS法测定不同浓度无机砷暴露时J774A.1巨噬细胞的增殖活力。2、Western blot免疫印迹法检测无机砷处理组LC3、p62、LAMP1、LAMP2、Cathepsin B、Cathepsin D、Cathepsin S、Cathepsin L和TFEB的蛋白表达水平。3、J774A.1巨噬细胞进行TFEB免疫荧光染色。4、Real-time PCR法分析Cd80、Cd86、Map1lc3a/b、p62、Lamp1、Lamp2和Tfeb mRNA的表达水平。应用SPSS17.0软件进行数据的统计分析。结果:1、低浓度0.25μM As~Ⅲ对J774A.1巨噬细胞有轻微促增殖作用,0.5-2μM As~Ⅲ对细胞增殖活力无毒性效应,2.5-10μM As~Ⅲ明显降低细胞的增殖能力(P<0.05)。2...

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略语
1 前言
2 材料与方法
    2.1 主要仪器和试剂
        2.1.1 主要仪器
        2.1.2 主要试剂
    2.2 主要试剂的配置
    2.3 J774A.1巨噬细胞系的培养
    2.4 检测指标及测定方法
    2.5 统计学分析
3 结果
    3.1 无机砷暴露对J774A.1巨噬细胞增殖活力的影响
    3.2 无机砷暴露对J774A.1巨噬细胞形态的影响
    3.3 无机砷暴露对J774A.1巨噬细胞协同刺激因子的影响
    3.4 无机砷暴露对J774A.1巨噬细胞自噬小体形成的影响
        3.4.1 不同浓度无机砷暴露对J774A.1巨噬细胞LC3蛋白表达的影响·
        3.4.2 无机砷暴露不同时间对J774A.1巨噬细胞LC3蛋白表达的影响·
        3.4.3 无机砷暴露对J774A.1 巨噬细胞Map1lc3a/b m RNA表达的影响
    3.5 无机砷暴露对J774A.1 巨噬细胞p62/SQSTM1 的影响
        3.5.1 不同浓度无机砷暴露对J774A.1 巨噬细胞p62/SQSTM1 蛋白表达的影响
        3.5.2 无机砷暴露不同时间对J774A.1 巨噬细胞p62/SQSTM1 蛋白表达的影响
        3.5.3 无机砷暴露对J774A.1 巨噬细胞Sqstm1 m RNA表达的影响
    3.6 无机砷暴露对J774A.1巨噬细胞溶酶体的影响
        3.6.1 无机砷暴露对J774A.1 巨噬细胞溶酶体相关膜蛋白LAMP1 和LAMP2蛋白表达的影响
        3.6.2 无机砷暴露对J774A.1 巨噬细胞溶酶体相关膜蛋白Lamp1 和Lamp2b m RNA表达的影响
        3.6.3 无机砷暴露对J774A.1巨噬细胞溶酶体组织蛋白酶蛋白表达的影响
    3.7 无机砷暴露对J774A.1 巨噬细胞TFEB的影响
        3.7.1 无机砷暴露对J774A.1 巨噬细胞TFEB蛋白表达的影响
        3.7.2 无机砷暴露对J774A.1 巨噬细胞Tfeb m RNA表达的影响
        3.7.3 无机砷暴露对J774A.1 巨噬细胞TFEB核定位的影响
4 讨论
5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
文献综述
    参考文献
实践报告
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3981867