脂氧合酶在四种细胞系的表达及SV-HUC细胞中介导联苯胺氧化应激

发布时间：2017-05-28 17:00

  本文关键词：脂氧合酶在四种细胞系的表达及SV-HUC细胞中介导联苯胺氧化应激，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：[目的]研究四种人正常细胞系(SV-HUC、HBE、HTR-8、HaCat)脂氧合酶同工酶蛋白表达及诱导表达情况,并比较5-LOX与CYP1B1/2E1蛋白表达水平；同时探讨联苯胺(BZD)对其致癌主要的靶细胞人膀胱上皮细胞(SV-HUC)的氧化应激作用及5-LOX对其作用的影响；为LOX协同氧化外源性化学物及其损伤提供进一步的线索。[方法]①蛋白印迹法测定5-LOX.12-LOX.15-LOX-2、CYP1B1CYP2E1蛋白表达水平；②以SV-HUC细胞为氧化应激研究目标细胞,不同浓度BZD(50、100、200μmol)染毒SV-HUC细胞24h,采用荧光分光光度计测定细胞内ROS水平,分光光度计超氧歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和抗氧化剂(GSH)含量的变化,酶标仪检测细胞内丙二醛(MDA)的含量；同时测定5-LOX特异性抑制剂AA861对上述氧化应激指标的影响。[结果]①四种正常细胞中均有5-LOX、15-LOX-2的表达,苯并(a)芘、BZD可诱导5-LOX表达增加；SV-HUC细胞中5-LOX蛋白表达水平与CYP2E1相差不大,高于CYP1B1;在正常HBE、HaCat、HTR-8细胞中,5-LOX蛋白表达水平低于CYP1B1;②BZD可诱导SV-HUC细胞内ROS水平、CAT酶活力及MDA含量增加,BZD为100、200μmol/L时ROS和CAT活力显著增加(p0.05),200μmol/L BZD时MDA增加具有统计学差异(p0.05),细胞内SOD酶活力随着BZD浓度增加呈现先升高后降低的趋势(p0.05),细胞内GSH含量随着毒物浓度升高而下降,BZD为200μmol/L时降低具有统计学意义(p0.05)；预先使用不同浓度的抑制剂AA861的高浓度BZD组,AA861对上述氧化应激指标起到保护作用,以浓度为10μmol/L的AA861较好。[结论]5-LOX可能是上述四种人正常细胞系中协同氧化外源性化学物的主要的LOX同工酶；5-LOX抑制剂AA861对BZD所致其致癌作用主要靶细胞SV-HUC细胞氧化应激具有保护作用,提示BZD在该细胞中可能通过5-LOX代谢活化,导致氧化应激,可能与联苯胺致膀胱癌有关；AA861可以抑制BZD引起的氧化应激。图
【关键词】：脂氧合酶 联苯胺 氧化应激 AA861
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R114
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 目录7-9
• 英文缩略表9-11
• 1 前言11-16
• 1.1 脂氧合酶11-13
• 1.2 联苯胺、氧化应激与脂氧合酶13-16
• 2 材料和方法16-30
• 2.1 研究技术路线16-17
• 2.2 材料17-20
• 2.2.1 细胞来源17
• 2.2.2 主要仪器和耗材17-18
• 2.2.3 主要试剂18-19
• 2.2.4 主要试剂的配制19-20
• 2.3 检测指标及测定方法20-29
• 2.3.1 MTT法检测细胞活性20-21
• 2.3.2 蛋白免疫印迹法(Western blot)分析蛋白表达水平21-23
• 2.3.3 细胞内活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)的测定23-24
• 2.3.4 细胞内CAT、SOD、GSH的测定24-28
• 2.3.5 细胞内丙二醛(MDA)的测定28-29
• 2.4 统计分析29-30
• 3 结果30-42
• 3.1 苯并(a)芘和联苯胺对细胞存活率的影响(MTT)30-32
• 3.1.1 苯并(a)芘对HBE、HTR-8、和HaCat细胞存活率的影响30-31
• 3.1.2 联苯胺及AA861对SV-HUC存活率的影响31-32
• 3.2 各种细胞系蛋白表达情况32-36
• 3.2.1 SV-HUC细胞LOX及CYP1B1/2E1的蛋白的表达32-35
• 3.2.2 HBE、HTR-8、HaCat细胞LOX蛋白表达35-36
• 3.3 5-LOX介导联苯胺所致SV-HUC细胞氧化应激36-42
• 3.3.1 联苯胺及AA861对细胞内ROS的影响36-37
• 3.3.2 联苯胺及AA861对细胞内抗氧化酶CAT、SOD的影响37-39
• 3.3.3 联苯胺及AA861对细胞内抗氧化物GSH的影响39-40
• 3.3.4 联苯胺及AA861对细胞内MDA的影响40-42
• 4 讨论42-49
• 4.1 某些肝外组织细胞系脂氧合酶蛋白表达42
• 4.2 5-LOX在联苯胺引起SV-HUC细胞氧化应激的作用42-49
• 4.2.1 联苯胺对SV-HUC细胞ROS形成的影响及AA861的拮抗作用44-45
• 4.2.2 联苯胺对SV-HUC细胞SOD、CAT酶活力影响及AA861的拮抗作用45-46
• 4.2.3 联苯胺对SV-HUC细胞GSH含量的变化及AA861的拮抗作用46-47
• 4.2.4 联苯胺对SV-HUC细胞MDA的形成的影响及AA861的拮抗作用47
• 4.2.5 SV-HUC细胞中5-LOX在联苯胺引起的氧化应激中的可能作用47-49
• 5、结论49-50
• 参考文献50-55
• 综述55-70
• 参考文献63-70
• 攻读学位期间主要的研究成果70-71
• 致谢71

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

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本文编号：403022