棉酚致小鼠睾丸生精细胞凋亡及Bax、Bcl-2表达相关性研究

发布时间：2017-06-04 09:02

  本文关键词：棉酚致小鼠睾丸生精细胞凋亡及Bax、Bcl-2表达相关性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：为了研究探讨棉酚对雄性小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响。本试验选用48只4-5周龄20.21±1.56g健康的雄性昆明小鼠为研究对象。在室温条件下常规饲养1周,适应环境之后随机分为4组,每组12只,对照组(1%羧甲基纤维素钠0.4 m L),低剂量组(30 mg?kg-1?d-1)、中剂量组(60 mg?kg-1?d-1)、高剂量组(240 mg?kg-1?d-1),灌服由1%羧甲基纤维素钠稀释的棉酚0.4 m L,连续灌胃给药20天。第21天处死,取睾丸组织保存,用于各项试验检测。通过光学显微镜观察睾丸组织病理学变化;透射电镜观察棉酚对睾丸生精细胞超微结构的影响;原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测睾丸组织生精细胞的凋亡情况;免疫组织化学法检测Bax和Bcl-2蛋白的分布和表达;RT-PCR法检测睾丸组织Bax m RNA和Bcl-2 m RNA的表达。研究结果表明:苏木精-伊红(HE)染色观察到小鼠睾丸组织结构,对照组无明显的病理变化,低、中剂量组病变轻微;高剂量组正常结构遭到严重的破坏,结构松散,生精小管管壁变薄,各级生精细胞排列紊乱,生精细胞大量的成团脱落到管腔内,甚至没有成熟的精子。透射电镜观察到对照组各级生精细胞超微结构完整,细胞器结构清晰;低剂量组变化较小;中剂量组和高剂量组生精细胞超微结构损伤严重,可以观察到自噬体,成熟精子顶体膜断裂。TUNEL检测发现对照组小鼠睾丸组织中仅有零星散在的凋亡细胞;凋亡指数,与对照组相比,低剂量组升高但不显著(P0.05),中剂量组与高剂量均都显著升高(0.01P0.05,P0.01)。Bax蛋白的表达结果,低剂量组较对照组有所升高(P0.05);中剂量组表达明显升高(0.01P0.05);高剂量组升高极显著(P0.01);与低剂量组相比,中剂量组与高剂量组Bax蛋白显著升高(0.01P0.05,P0.01)。低剂量组Bcl-2蛋白表达较对照组升高(P0.05),中剂量组和高剂量组Bcl-2蛋白显著降低(0.01P0.05,P0.01)。与对照组相比,低剂量组Bcl-2m RNA表达量明显升高(0.01P0.05),Bax m RNA表达量增加,但是无统计学意义;与对照组和低剂量组相比,中剂量组Bcl-2 mRNA表达量显著降低(0.01P0.05),Bax mRNA表达量显著升高(0.01P0.05);高剂量组较对照组和低剂量组Bcl-2 m RNA表达量都极显著降低(P0.01),Bax m RNA表达量都升高极显著(P0.01)。高剂量组Bcl-2 mRNA表达较中剂量组明显降低(0.01P0.05),Bax m RNA表达量明显升高(0.01P0.05)。综上所述棉酚能够破坏小鼠睾丸组织结构,引起生精细胞凋亡,而且这种凋亡与Bax表达升高,Bcl-2表达降低有关。
【关键词】：棉酚 睾丸生精细胞 细胞凋亡 Bax Bcl-2
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R114
【目录】：

• 摘要8-9
• 英文摘要9-11
• 1 前言11-20
• 1.1 棉酚的物理和化学性质11
• 1.2 棉酚的药理作用11-12
• 1.2.1 棉酚的抗肿瘤作用11-12
• 1.2.2 棉酚的抗病毒作用12
• 1.2.3 棉酚的抗炎作用12
• 1.3 棉酚的毒性12-14
• 1.3.1 棉酚的雄性生殖毒性13-14
• 1.3.2 棉酚的雌性生殖毒性14
• 1.4 细胞凋亡14-17
• 1.4.1 细胞凋亡概述14-15
• 1.4.2 细胞凋亡的通路15-16
• 1.4.3 细胞凋亡相关蛋白16-17
• 1.5 棉酚与细胞凋亡17-18
• 1.5.1 棉酚与线粒体的作用17-18
• 1.5.2 棉酚与酶的作用18
• 1.6 生精细胞凋亡的基因调控18
• 1.7 试验研究的目的与意义18-20
• 2 材料与方法20-25
• 2.1 试验动物20
• 2.2 分组处理20
• 2.3 主要仪器与试剂20-21
• 2.3.1 主要仪器及设备20-21
• 2.3.2 主要试剂21
• 2.4 检测内容与方法21-24
• 2.4.1 光镜下睾丸组织学的观察21
• 2.4.2 睾丸组织超微结构的观察21
• 2.4.3 检测睾丸生精细胞凋亡21-22
• 2.4.4 检测睾丸组织中Bcl-2、Bax蛋白的表达22-23
• 2.4.5 检测睾丸组织Bcl-2 m RNA、Bax mRNA表达23-24
• 2.5 实验数据的处理与分析24-25
• 3 结果25-36
• 3.1 光镜下睾丸组织学观察结果25-26
• 3.2 睾丸组织超微结构的观察结果26-28
• 3.3 小鼠睾丸组织中生精细胞凋亡情况28-30
• 3.4 小鼠睾丸组织中Bcl-2、Bax蛋白表达情况30-33
• 3.5 小鼠睾丸组织中Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达情况33-36
• 3.5.1 小鼠睾丸总RNA的提取结果33
• 3.5.2 小鼠睾丸Bax、Bcl-2、β-actin mRNA的鉴定结果33-34
• 3.5.3 小鼠睾丸Bax、Bcl-2 m RNA表达水平检测结果34-36
• 4 讨论36-40
• 4.1 棉酚对小鼠睾丸组织结构的影响36
• 4.2 棉酚对小鼠生精细胞亚结构的影响36-37
• 4.3 棉酚对生精细胞凋亡的影响37-38
• 4.4 棉酚对小鼠生精细胞Bcl-2 和Bax蛋白表达的影响38-39
• 4.5 棉酚对小鼠生精细胞Bcl-2,Bax基因表达的影响39-40
• 5 结论40-41
• 致谢41-42
• 参考文献42-49
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文49

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 ;棉酚对钾和能量代谢的影响及其与镁离子的关系[J];武汉医学院学报;1977年01期

2 全国男用节育药(棉酚)科研协作组;一种新的男用节育药——棉酚[J];科学通报;1977年12期

3 钱绍祯,胡俊宏,何林兴,孙民兴,黄元铸,方京华;棉酚首次试用于男子节育[J];科学通报;1980年22期

4 唐希灿,朱明康,石其贤;~(14)C-棉酚在四种动物体内吸收、分布和排泄的比较研究[J];药学学报;1980年04期

5 李玉梅;;全国棉酚总结会简况[J];医学研究通讯;1980年10期

6 石朝周,丁惟培,余铭清,吴熙瑞;棉酚镁的制备及抑精毒、性研究[J];武汉医学院学报;1981年04期

7 庄元忠;徐敏源;赵秀菊;刘裕;苏树芸;;棉酚对猕猴肝肾影响的电镜初步观察[J];浙江医学;1981年01期

8 雷海鹏;棉酚研究的回顾与展望[J];药学学报;1982年01期

9 姜德和,薛绣鸿;一苯胺棉酚—棉酚中的一种杂质[J];药学学报;1982年02期

10 柯一保;水溶性棉酚制剂的制备[J];生殖与避孕;1982年02期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 邓思君;袁慧;;氧化损伤在醋酸棉酚诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡中的作用[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会第七届代表大会暨学术研讨会论文集（下册）[C];2011年

2 贾光锋;吴道澄;;棉酚的提取与抗肿瘤作用研究进展[A];中国生物医学工程进展——2007中国生物医学工程联合学术年会论文集（下册）[C];2007年

3 姜海霞;曹星欣;黄浩;魏惠玲;周峗;姜标;;消旋棉酚的拆分研究[A];中国化学会第26届学术年会有机化学分会场论文集[C];2008年

4 孙云章;朱崇淼;毛胜勇;朱伟云;;棉酚对瘤胃真菌和瘤胃细菌体外发酵稻草活力的影响[A];第四届全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2002年

5 倪鸣;袁慧;;醋酸棉酚对小鼠黄体细胞凋亡的影响[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会2009年学术研讨会论文集[C];2009年

6 焦洪超;姜明君;孟晓彤;林海;;饲料中不同棉酚水平及添加Fe和VA对蛋鸡生产的影响[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十一次全国动物营养学术研讨会论文集[C];2012年

7 王琛柱;张书芳;钦俊德;张青文;杨奇华;;苏云金杆菌与棉酚的协同作用对棉铃虫生存发育的影响[A];杀虫微生物[C];1992年

8 曹星欣;姜海霞;黄浩;李阳;姜标;;从棉籽中提取醋酸棉酚[A];中国化学会第26届学术年会有机化学分会场论文集[C];2008年

9 薛冰纯;王滔;刘二保;;流动注射化学发光法超灵敏检测棉酚[A];第八届全国发光分析暨动力学分析学术研讨会论文集[C];2005年

10 倪鸣;袁慧;;棉酚对小鼠卵巢黄体细胞Bcl-2和Bax基因表达及孕激素影响的研究[A];中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第六届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2008年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 王刚　唐克伟;含棉酚饲料的科学应用[N];中国畜牧兽医报;2009年

2 本报记者 郭述金;男性避孕与棉酚再续前缘[N];中国人口报;2002年

3 ;棉子(仁)饼粕的抗营养因子[N];中国畜牧兽医报;2008年

4 江南大学 赵建伟 教授;要安全使用棉籽饼粕，必须有效控制棉酚的危害[N];中国畜牧兽医报;2006年

5 本报记者 王丽媛;如何防治牛棉子饼中毒[N];河南科技报;2007年

6 记者朱彤;新疆在棉籽里开出大金矿[N];科技日报;2002年

7 中化;我国棉仁分离蛋白技术跻身世界前列[N];北方经济时报;2002年

8 张田勘;棉子可成美食新宠[N];健康报;2006年

9 胡继光;我棉仁分离蛋白技术跻身世界前列[N];中国化工报;2002年

10 挑战集团技术部 胡祥均;植物性蛋白饲料原料间的替换应用[N];中国畜牧报;2004年

中国博士学位论文全文数据库 前9条

1 杨霞;高效棉酚降解菌株的筛选鉴定及其差异蛋白质组学研究[D];浙江大学;2010年

2 周生飞;高效降解棉酚菌种筛选、降解机理及固体发酵工艺研究[D];甘肃农业大学;2011年

3 王蔼为;低剂量棉酚及左旋棉酚用于男性抗生育的临床研究[D];中国协和医科大学;1989年

4 金颖;棉酚所致低钾血症机制的研究[D];中国协和医科大学;1988年

5 孟e，

本文编号：420487