医学论文论甘油磷酸胆碱的层析纯化及其稳定性研究(2)

　　2．2．8 高温试验 取分离纯化的GPC(批号100301)3份，编号为100301—1、100301—2、100301— 3，分别平铺在培养皿中，使其厚度≤5 mm，在60℃下放置10 d，于第5、1O天取样，笔耕论文，与第0天的含量比较，考察其含量变化。计算平均含量为99．65％ ，RSD为0．42％(n=9)，结果说明含量无明显变化，表明GPC原料药对热比较稳定。

　　2．2．9 高湿试验取分离纯化的GPC(批号100301)三份，编号为100301—1、100301—2、100301—3，分别平铺在培养皿中，使其厚度≤5mm，在25℃于相对湿度75％ 条件下放置10 d，于第5、l0天取样，与第0天的含量比较，考察其含量变化。试验结果：平均含量为99．30％ ，RSD为0．47％(n=9)，表明GPC对湿比较稳定。

　　2．2．1O 加速试验分别取GPC(批号为100301、100302、100303)各一份，在密闭器皿中于40~C、相对湿度75％ 的条件下放置6个月，于第1、2、3、6个月月末取样，与第0个月的含量比较，考察其含量的变化。计算含量平均值为99．6l％，RSD 为0．57％(n=15)，结果含量无明显变化，表明GPC比较稳定。试验结果见表5。

　　2．2．11 长期试验分别取GPC(批号为100301、100302、100303)各一份，在密闭器皿中于25℃ ，相对湿度60％的条件下放置12个月，于第3、6、9、12个月月末取样，与第0个月的含量比较，考察其含量的变化。平均含量为99．12％ ，RSD为0．50％(t= 15)，即含量无明显变化，表明GPC化学性质和物理性质比较稳定。试验结果见表6。

　　2．2．12 重复性试验取配制5份浓度为0．5 g·L 的GPC供试品溶液，按“2．2．4”项下色谱条件进行测定，按照上述含量测定方法，测得5份GPC供试品的含量分别为99．83％ 、100．11％ 、99．92％ 、98．57％ 、99．98％ ，计算RSD为0．63％ 。结果表明本法测定的重复性良好。

　　3 讨论试验结果表明，通过三氧化二铝脱色法和硅胶柱层析法相结合的工艺对甘油磷酸胆碱进行分离纯化，能够得到含量达99．5％ 以上的产品。该分离纯化工艺简单，可操作性强，适用于工业化生产。

　　采用美国Alltech2000型蒸发光散射检测器，使用高效液相色谱法研究甘油磷酸胆碱的稳定性，根据检测结果，GPC色谱峰的理论塔板数均在3000以上。

　　该方法灵敏、准确、重现性好。通过影响因素试验、加速试验和长期试验考察后，甘油磷酸胆碱的性状没有发生明显改变，且产品的各项指标均符合中国药典2010版的规定，产品的稳定性良好。

　　实事上，甘油磷酸胆碱在意大利LPB公司上市，临床应用多年，I临床效果显著。流行病学调查n ，我国老年痴呆患者约600万左右，目前尚无特效治疗药物，研发治疗相关疾病新药是当务之急。根据国家FDA新药标准，甘油磷酸胆碱可以做为“只要该活性成分未被批准上市”新药研究开发。有关研究表明，新化学实体研发失败的原因主要归结为以下3个方面：安全性、有效性和经济性。本实验室对以大豆磷脂为原料制备甘油磷酸胆碱进行了深入研究，采用非水相生物催化制备甘油磷酸胆碱，生物催化反应所用试剂毒性小，且有高度专一性，且不改变卵磷脂的天然结构，反应条件温和，该工艺经济、安全、环保，适合工业化生产。

　　进一步对甘油磷酸胆碱的鉴别和含量测定方法进行了探索，采用化学鉴别法、薄层色谱鉴别法、HPLC鉴别法和红外色谱图鉴别法，能够简便、可靠、真实、有效地对甘油磷酸胆碱进行鉴别。所采用的HPLC—ELSD含量检测法，专属性强、重现性高，可作为三类新药GPC的含量标准控制。

　　综上所述，本实验室以大豆磷脂为原料，采用科学、先进的酶法制备和纯化GPC的工艺，使产品质量达到申报国家新药的质量标准。在强光照射、高温、高湿等条件下的稳定性研究结果表明，甘油磷酸胆碱的物理性质和化学性质比较稳定，从而为其生产、包装、贮存、制剂研发等提供了科学依据。

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