氯化镧通过NF-κB通路调控RANKL诱导破骨细胞分化成熟的体外实验研究

发布时间：2017-06-21 01:10

  本文关键词：氯化镧通过NF-κB通路调控RANKL诱导破骨细胞分化成熟的体外实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：通过体外实验观察一定浓度氯化镧对RANKL诱导的破骨细胞分化成熟的影响及对破骨细胞分化成熟主要相关信号通路因子在蛋白及磷酸化水平表达的作用，为进一步研究镧元素对于破骨细胞分化成熟的影响以及未来对镧元素更多的基础研究提供理论参考。 方法：体外提取小鼠骨髓来源的巨噬细胞（Bone Marrow-derived Macrophage,BMM），并使用核因子κB受体活化配体（Receptor Activitor of NuclearFactor-kappaB Ligand，RANKL）及巨噬细胞集落刺激因子（Macrophage-ColonyStimulating Factor，M-CSF）体外诱导培养其分化为成熟的破骨细胞。使用CCK-8检测加入不同浓度氯化镧对细胞活性的影响并选取合适的实验浓度进行后续相关实验。按研究目的并结合CCK-8结果将细胞随机分为五组：空白对照组（A组）、阳性对照组（B组）、50μmol/L低浓度氯化镧组（C组）、100μmol/L中浓度氯化镧组（D组）、200μmol/L高浓度氯化镧组（E组）。采用TRAP （TartrateResistant Acid Phosphatase）染色检测各组成熟破骨细胞的数量及细胞TRAP阳性染色面积。Western Blot检测氯化镧的加入对破骨细胞分化成熟重要通路NF-κB信号通路相关因子（p65及IκBα等）在蛋白及磷酸化水平及对破骨细胞重要转录因子活化T细胞核因子1蛋白（NFATc1）表达的影响。 结果：CCK-8检测在24、48、72、96小时时间点，800μM及以下浓度的氯化镧对BMM细胞的生存未见明显影响，差异无统计学意义（P＞0.05），但当浓度超过800μM时，可见相对明显的细胞毒作用和生长抑制作用（P＜0.05）。 TRAP染色发现，空白对照组未见破骨细胞生成，而B、C、D、E组均有成熟破骨细胞生成，差异有统计学意义（P＜0.05）。C、D、E组在加入不同浓度氯化镧后相较B组只加RANKL诱导的破骨细胞分化成熟均受到不同程度的抑制，差异有统计学意义（P＜0.05），且加入不同浓度氯化镧的C、D、E组各组间差异有统计学意义（P＜0.05）。 WesternBlot检测结果发现，氯化镧可抑制NF-κB通路的激活,并在长期过程中减少破骨细胞重要转录因子蛋白NFATc1的表达。 结论：本实验中适当浓度范围的氯化镧对细胞未见明显细胞毒作用；氯化镧可在一定程度上抑制RANKL诱导的破骨细胞的分化成熟，减少活化T细胞核因子1蛋白（NFATc1）的表达，且作用在一定范围内与剂量成一定的量效关系。其机制可能与氯化镧能够抑制破骨细胞NF-κB通路相关因子的激活作用有关。
【关键词】：氯化镧 破骨细胞 NF-κB BMM RANKL
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R114
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 第1章 引言10-13
• 第2章 材料与方法13-21
• 2.1 实验材料13-15
• 2.1.1 实验细胞来源13
• 2.1.2 主要实验试剂及配制13-14
• 2.1.3 主要实验仪器及设备14-15
• 2.2 实验方法15-20
• 2.2.1 实验用品的灭菌15
• 2.2.2 骨髓诱导培养法培养破骨细胞15-16
• 2.2.3 实验分组及处理16
• 2.2.4 CCK-8 细胞毒性检测16-17
• 2.2.5 TRAP 染色17
• 2.2.6 Western Blot 检测 NF-κB 通路激活早期指标 p65、IκB 及相对应磷酸化指标的表达17-20
• 2.2.7 Western Blot 检测破骨细胞分化成熟重要转录因子蛋白 NFATc1 的表达20
• 2.3 统计学分析20-21
• 第3章 结果21-28
• 3.1 CCK-8 细胞毒性检测结果21-23
• 3.2 TRAP 染色破骨细胞计数及染色面积百分比23-24
• 3.3 氯化镧对破骨细胞 NF-κB 信号通路相关指标 p65、IκB 在蛋白及相磷酸化的影响24-27
• 3.4 氯化镧对破骨细胞分化成熟重要转录因子蛋白 NFATc1 表达的影响27-28
• 第4章 讨论28-35
• 4.1 破骨细胞与人工关节假体松动和骨代谢异常相关疾病的关系28-29
• 4.2 破骨细胞分化成熟相关信号通路29-31
• 4.3 镧系元素概述其对破骨细胞活性的影响31-32
• 4.4 氯化镧对破骨细胞分化成熟的影响32
• 4.5 使用 BMM 细胞诱导破骨细胞的分化成熟32-33
• 4.6 缺点与不足33
• 4.7 总结与展望33-35
• 第5章 结论35-36
• 致谢36-37
• 参考文献37-40
• 附图40-42
• 攻读学位期间的研究成果42-43
• 综述43-53
• 参考文献50-53

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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本文编号：467319