环境高风险区环境样品污染物去甲基化表观遗传毒性研究

发布时间：2017-07-05 12:21

  本文关键词：环境高风险区环境样品污染物去甲基化表观遗传毒性研究

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【摘要】：目的：对化学物去甲基化表观遗传毒性QDMP评价方法进行性能测试，应用此方法定量评价某环境高风险区环境样品的去甲化表观遗传毒性，并探索影响环境样品表观遗传毒性大小的主要成分。 方法：将pEGFP-C3质粒人工甲基化处理，处理后的C3质粒荧光蛋白基因启动子区处于高甲基化状态，随后将该质粒转染进人类HepG-2肝癌细胞株，以需检测污染物为受试物与改造后的细胞株(EGFP-HepG2)共培养，依据细胞绿色荧光强度来定量检测和评价污染物的去甲基化表观遗传毒性的强弱（简称QDMP方法），对QDMP方法的灵敏性和稳定性进行测试，并依据此方法，选取某环境高风险区的地表水、地下水、土壤和底泥样品为代表性的环境样品，应用QDMP方法检测和评价其去甲基化表观遗传毒性，并对环境样品污染物提取液的主要成分进行扫描检测分析。 结果：QDMP方法性能测试结果显示，该方法的评价灵敏度为0.00004μM；对浓度范围介于0.00016，0.0008，0.004，0.02，0.1μM之间的5-Aza-CdR样品进行测试，发现同一样品5个平行样品之间的荧光检测变异程度介于7.5~23.9%之间，显示出该方法具有一定的稳定性。环境样品检测结果显示，在9个测试样（2个地表水、3个地下水、2个土壤、2个底泥）中，有7个样品去甲基化能力较强，占总个测试样品的78%，其去甲基化表观遗传毒性介于0.065-0.257μM的5-AZA-CdR当量之间。一个底泥样品提取液毒性最高，毒性当量为0.257μM；重金属检测发现其中的Cd的浓度为1.62mg/Kg，超过土壤中的标准限值1.00mg/Kg；一个地下水样品的毒性较高，毒性当量为0.142μM；重金属检测发现其中的Mn的浓度为4868.87ug/L，超过土壤中的标准限值300ug/L。四个土壤或底泥样品中，三个样品的去甲基化能力较强，，重金属检测发现四个样品的重金属均超标，环境样品表观遗传毒性检测结果与环境分析结果具有基本一致的趋势。 结论：QDMP方法具有良好的灵敏性和稳定性；部分环境样品的去甲基化表观遗传毒性较强，对于环境样品污染物表观遗传毒性效应应该足够重视；环境样品去甲基化表观遗传毒性可能与当地的重金属污染有关。
【关键词】：环境样品 pEGFP-C3 去甲基化 表观遗传
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R114
【目录】：

• 英文缩略词表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 1、引言10-14
• 2、材料和方法14-24
• 2.1 主要材料14-16
• 2.1.1 材料与仪器14-15
• 2.1.2 主要试剂15-16
• 2.2 实验方法16-24
• 2.2.1 QDMP 方法基本原理与性能测试16-18
• 2.2.2 环境样品去甲基化表观遗传毒性测试18-23
• 2.2.3 环境样品重金属提取液成分检测23-24
• 3、结果24-31
• 3.1 C3 质粒转染 HepG2 细胞株24
• 3.2 细胞绿色荧光的实验效果24-25
• 3.3 绿色荧光流式细胞检测效果25-26
• 3.4 定量标准曲线26
• 3.5 QDMP 方法性能测试结果26-28
• 3.5.1 QDMP 方法的灵敏性结果26-27
• 3.5.2 QDMP 方法的稳定性结果27-28
• 3.6 环境样品的表观遗传毒性评价结果28
• 3.7 环境样品提取液成分检测结果28-31
• 4、讨论31-34
• 5、结论34-39
• 6、附录39-41
• 7、致谢41-42
• 8、综述42-52
• 参考文献49-52
• 9、附件52-55

【参考文献】

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1 王先良;满江红;王春辉;江艳;王小利;杨怡姝;王菲菲;赵秀阁;李琴;段小丽;张衍q

本文编号：521969