牛乳过敏原酶联免疫分析方法的建立

发布时间：2017-07-06 06:04

  本文关键词：牛乳过敏原酶联免疫分析方法的建立

  更多相关文章： 牛乳过敏原 β-乳球蛋白 α-乳白蛋白 酪蛋白 酶联免疫检测方法

【摘要】：牛乳中酪蛋白,β-乳球蛋白和α-乳白蛋白是重要的食品过敏原,尤其在婴幼儿中引起过敏反应。本论文制备了牛乳全蛋白,并通过免疫动物制备了特异性识别牛乳蛋白的多克隆抗体,优化建立了牛乳过敏原蛋白问接竞争免疫分析方法,并用于实际样品的检测。 分别以牛乳全蛋白,β-乳球蛋白为免疫原免疫动物制备了兔多克隆抗体、鼠抗多克隆抗体。通过对包被量,抗体稀释倍数,蛋白稀释液pH等检测条件的优化,针对牛乳全蛋白和β-乳球蛋白分别建立了问接竞争酶联免疫检测方法。 β-乳球蛋白间接竞争酶联免疫检测方法的工作条件为：包被蛋白0.05μg/we11,封闭液为1%BSA/PBS,抗体稀释倍数为1：10000,蛋白稀释液为pH8.5的PBS, IC50为3.08±0.24μ/mL。交叉实验结果表明,p-乳球蛋白抗体与酪蛋白交叉反应率为1.59%,与其余几种常见食物过敏原蛋白无交叉反应。 牛乳全蛋白间接竞争ELISA方法检测全蛋白的工作条件为：包被量为0.05μg/well,封闭液为1%BSA/PBS,抗体稀释倍数为1：100000,蛋白稀释液为pH8.5的PBS,IC50为3.19±0.17μg/mL,同时该方法可有效检测酪蛋白、6-乳球蛋白、α-乳白蛋白,IC50分别是：酪蛋白3.52±0.46μg/mL,β-乳球蛋白3.91±0.84μg/mL,α-乳白蛋白16.27±0.06μg/mL。交叉试验表明该方法与大豆、芝麻、花生、鸡蛋等几种常见过敏原蛋白无交叉反应,显示了较好的特异性。板内变异系数为0.25%～8.53%,板问变异系数为0.75%-11.72%,证明该方法具有良好的重现性。 将牛乳全蛋白间接竞争ELISA方法用于检测白面包,添加回收率为81.79%～95.96%,板内和板问变异系数分别为6.41%～8.93%,0.18～6.70%。饼干的添加回收率为81.17%～89.30%,板内和板问变异系数分别为1.82%～3.52%,3.02～14.11%。说明所建立方法检测结果准确,能有效用于食品中牛乳蛋白含量的准确测定。
【关键词】：牛乳过敏原 β-乳球蛋白 α-乳白蛋白 酪蛋白 酶联免疫检测方法
【学位授予单位】：天津科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R155.5
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 1 前言8-23
• 1.1 食物过敏8
• 1.2 食物过敏原及研究现状8-12
• 1.2.1 食物过敏原8-9
• 1.2.2 食物过敏的机制9-10
• 1.2.3 食物过敏原的检测方法10-11
• 1.2.4 食物过敏原的安全管理11-12
• 1.3 免疫分析技术概述12-14
• 1.3.1 免疫分析基本理论12-13
• 1.3.2 酶联免疫分析概述13-14
• 1.4 牛乳过敏原14-21
• 1.4.1 牛乳的概述14
• 1.4.2 牛乳蛋白的性质14-16
• 1.4.3 牛乳过敏原蛋白的研究进展16-19
• 1.4.4 牛乳过敏原蛋白的检测方法19-21
• 1.5 论文研究的目的及意义21
• 1.6 研究内容21-23
• 2 材料与方法23-35
• 2.1 实验材料23-26
• 2.1.1 实验动物23
• 2.1.2 实验药品23-24
• 2.1.3 实验试剂24
• 2.1.4 实验仪器与材料24
• 2.1.5 待测样品24
• 2.1.6 实验溶液的配制24-26
• 2.2 实验方法26-35
• 2.2.1 牛乳主要过敏原蛋白的制备和鉴定26-27
• 2.2.2 牛乳过敏原全蛋白多克隆抗体的制备27-29
• 2.2.3 β-乳球蛋白多克隆抗体的制备29-30
• 2.2.4 β-乳球蛋白间接竞争ELISA的建立30-31
• 2.2.5 β-乳球蛋白双抗夹心ELISA方法的建立31-32
• 2.2.6 牛乳过敏原全蛋白间接竞争ELISA方法的建立32
• 2.2.7 牛乳过敏原全蛋白双抗夹心ELISA方法的建立32
• 2.2.8 牛乳过敏原全蛋白间接竞争ELISA方法的精密度32-33
• 2.2.9 牛乳过敏原蛋白间接竞争ELISA方法的特异性33
• 2.2.10 牛乳过敏原全蛋白间接竞争ELISA方法用于样品的检测33-35
• 3 结果与讨论35-58
• 3.1 牛乳过敏原蛋白的制备与鉴定35
• 3.2 牛乳过敏原蛋白多克隆抗体的制备35-38
• 3.2.1 牛乳全蛋白抗体35-37
• 3.2.2 β-乳球蛋白抗体37-38
• 3.3 β-乳球蛋白间接竞争ELISA方法的建立38-41
• 3.3.1 β-乳球蛋白包被量和抗体稀释倍数的优化38-39
• 3.3.2 β-乳球蛋白稀释液pH的优化39-40
• 3.3.3 β-乳球蛋白间接竞争ELISA方法标准曲线的绘制40-41
• 3.4 β-乳球蛋白间接竞争ELISA方法的特异性41-42
• 3.5 β-乳球蛋白双抗体夹心ELISA方法的建立42-43
• 3.6 牛乳过敏原蛋白间接竞争ELISA方法的建立43-52
• 3.6.1 牛乳过敏原全蛋白间接竞争ELISA方法的建立43-46
• 3.6.2 牛乳全蛋白间接竞争ELISA方法检测酪蛋白的有效性46-48
• 3.6.3 牛乳全蛋白间接竞争ELISA方法检测β-乳球蛋白的有效性48-50
• 3.6.4 牛乳全蛋白间接竞争ELISA方法检测α-乳白蛋白的有效性50-52
• 3.7 牛乳过敏原全蛋白间接竞争ELISA方法的精密度52-54
• 3.7.1 板内变异53
• 3.7.2 板间变异53-54
• 3.8 牛乳过敏原全蛋白间接竞争ELISA方法的特异性54-55
• 3.9 基质影响的消除55-56
• 3.9.1 面包基质影响消除55
• 3.9.2 饼干基质影响消除55-56
• 3.10 添加回收56-58
• 3.10.1 面包样品的添加回收56-57
• 3.10.2 饼干样品的添加回收57-58
• 4 结论58-59
• 5 展望59-60
• 6 参考文献60-67
• 7 攻读硕士学位期间发表论文情况67-68
• 8 致谢68

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 孙秀兰;管露;单晓红;张银志;;食品过敏原体外检测方法研究进展[J];东北农业大学学报;2012年02期

2 王娟;张庆合;王志华;李红梅;;反相高效液相色谱法测定牛奶中的主要蛋白质[J];分析化学;2009年11期

3 杨勇,阚建全,赵国华,付陈梅;食物过敏与食物过敏原[J];粮食与油脂;2004年03期

4 孙伟东;宋继萍;赵玉平;;我国出口食品过敏原成分管理亟待规范的思考[J];农产品加工(学刊);2011年12期

5 吴海强;余晓;刘志刚;;食品过敏原指纹图谱快速检测研究(一)——鲫鱼、鲢鱼总蛋白2-DE指纹图谱分析[J];热带医学杂志;2006年01期

6 吴海强;余晓;刘志刚;;食品过敏原指纹图谱快速检测研究(二)——河虾总蛋白2-DE指纹图谱重现性分析[J];热带医学杂志;2006年02期

7 吴海强;余晓;刘志刚;;食品过敏原指纹图谱快速检测研究(三)——花生总蛋白 2- DE 指纹图谱和蛋白点 MALDI- TOF/MS分析[J];热带医学杂志;2006年03期

8 吴序栎;袁小平;刘志刚;吉坤美;;牛奶过敏原的分离、鉴定与纯化[J];中国乳品工业;2008年12期

9 詹政科;刘萍;吉坤美;李佳娜;仇什;刘志刚;;双抗体夹心ELISA法测定食物中牛奶过敏原蛋白成分[J];中国乳品工业;2009年05期

10 庞鹏;杨朝晖;杨晓伟;牟德华;;β-乳球蛋白凝胶及其应用[J];食品工程;2007年04期

，

本文编号：524957