基于颜色判定的RT-LAMP技术检测HCoV-NL63冠状病毒基因

发布时间：2017-07-21 03:00

  本文关键词：基于颜色判定的RT-LAMP技术检测HCoV-NL63冠状病毒基因

  更多相关文章： HCoV-NL RT-LAMP 快速检测

【摘要】：建立了一种适合于国境口岸简便、快速、灵敏和特异检测人冠状病毒NL63(HCoV-NL63)的核酸检测方法。通过建立基于颜色判定的逆转录环介导等温扩增(Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技术,针对HCoV-NL63核衣壳蛋白(Nucleocapsid,N)基因序列设计出6条特异性引物,在等温条件下(63℃)进行扩增反应60min,在扩增前加入钙黄绿素作为反应指示剂,并结合浊度仪进行实时监测,以最终反应颜色变化作为结果判断标准。利用该方法对同种属其他人冠状病毒、诺如病毒、流感病毒进行检测,以分析该方法的诊断特异性。应用该方法对梯度稀释的HCoV-NL63病毒RNA进行检测,以分析该方法的诊断灵敏性,并与常规real-time RT-PCR方法进行比较。结果显示,本研究建立的基于颜色判定的RT-LAMP方法在短时间内(40min)即可达到对HCoV-NL63的快速检测。该检测方法与加入其它病毒RNA模板溶液颜色均不产生改变,具有较高的检测特异性。检测灵敏性最低检测下限为1 600拷贝/反应。本研究建立的基于颜色判定的RT-LAMP方法可实现对HCoV-NL63冠状病毒现场快速检测,具有在国境口岸以及基层医疗机构和疫区现场推广应用的潜力。
【作者单位】： 无锡出入境检验检疫局中国检验检疫科学研究院(无锡)人体携带病原体研究室;中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒病应急技术中心;南京医科大学基础医学院江苏省现代病原生物学重点实验室;
【关键词】： HCoV-NL RT-LAMP 快速检测
【基金】：传染病重大专项(2014ZX10004001-002,2013ZX10004001)
【分类号】：R440;R185
【正文快照】： 人冠状病毒NL63(Human coronavirus NL63,HCoV-NL63)属于冠状病毒科(family Coronaviri-dae)、冠状病毒属(genus Coronavirus)的成员,基因组为单链正链的RNA,全长约27.5kb,与HCoV-229E同属于冠状病毒属α亚组[1]。HCoV-NL63自2004年首次从荷兰一名患有急性呼吸道感染儿童的鼻

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 周伯平,陈心春,王火生,李美忠,胡毅文,杜凡,徐六妹,杨桂林;一种新型冠状病毒基因的克隆和序列分析与传染性非典型肺炎病原学的调查[J];中华实验和临床病毒学杂志;2003年02期

2 ;农业部疫源调查组:人类SARS病毒来自野生动物[J];养殖与饲料;2003年07期

3 陶生策,杨仁全,李泽,张治位,周一鸣,张琼,朱沛轩,杜建宇,赵传赞,马清梅,任丽丽,王璨,蒋迪,刘彦华,杨华卫,荣利,安爽,李U，

本文编号：571088