双酚A诱导大鼠胰岛INS-1细胞DNA损伤及机制探讨

发布时间：2017-08-07 18:37

  本文关键词：双酚A诱导大鼠胰岛INS-1细胞DNA损伤及机制探讨

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【摘要】：目的：双酚A（Bisphenol A，BPA）是一种雌激素干扰物，广泛用于聚碳酸酯和环氧树脂的生产过程以及产品中。随着塑料制品在日常生活中的广泛应用，人们暴露于双酚A的机会也逐渐增多。许多动物试验研究已经证实双酚A具有生殖毒性作用，，并且能够影响正常的代谢功能。也有研究表明，双酚A能够影响胰岛细胞的功能并诱发胰岛素抵抗。本试验旨在了解双酚A是否会对INS-1细胞产生DNA损伤，并初步探讨其可能存在的毒性效应机制。 方法：本实验选择大鼠胰岛β细胞（INS-1），在不同浓度双酚A25、50、100μM条件下，采用单细胞凝胶电泳试验（SCGE）和蛋白质印迹法（western blot）检测双酚A诱导的DNA损伤及DNA损伤相关蛋白表达的情况。为了进一步探讨研究这种DNA损伤的可能机制，本次试验采用荧光分子探针2’,7’—二氢二氯荧光素（DCFH）及羟基喜树碱荧光素（OPT）的方法，检测细胞内活性氧类物质（ROS）和细胞内还原型谷胱甘肽（GSH）的变化情况，并通过N-乙酰半胱氨酸（NAC）的抗氧化干预试验，进而说明氧化应激性损伤在DNA损伤中的作用。试验结果用统计分析软件SPSS v11.5进行统计分析。 结果：彗星试验显示双酚A能够引起INS-1细胞DNA链断裂，呈彗星样拖尾，随着双酚A试验剂量的增加核DNA向彗星尾部迁移增多，尾长增加，尾矩以及尾DNA%明显增大，与DMSO溶剂对照组相比差别显著，不同剂量组间差别具有统计学意义。蛋白印迹法显示DNA损伤相关蛋白p53及p-Chk2(T68)的表达水平明显升高。发现试验细胞内活性氧类物质生成明显增多，还原型谷胱甘肽水平显著下降，提示了氧化应激状态存在。经N-乙酰半胱氨酸（NAC）抗氧化剂干预后，显示细胞内活性氧物质生成减少，同时细胞DNA链断裂情况减轻，DNA损伤蛋白p53及p-Chk2(T68)的表达水平相应下降。 结论:双酚A能够引起INS-1细胞的DNA损伤，造成DNA损伤蛋白（p53，p-Chk2(T68)）的表达增加。双酚A能够诱导INS-1细胞中活性氧物质生成增多，使细胞处于氧化应激状态，N-乙酰半胱氨酸（NAC）干预试验显示，INS-1细胞内活性氧物质生成明显减少，细胞DNA链断裂程度减轻，损伤蛋白表达水平明显下降，说明DNA损伤作用机制与氧化应激有关。
【关键词】：双酚A 大鼠胰岛β细胞（INS-1） DNA链断裂 氧化应激 p53 p-Chk2(T68)
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R114
【目录】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• （一）前言11-12
• （二）材料与方法12-19
• 2.1.主要药品与试剂12-13
• 2.2.主要仪器13
• 2.3.试验方法13-19
• 2.4.统计方法19
• （三）结果19-25
• 3.1.细胞活性试验19
• 3.2.双酚 A 诱导 INS-1 细胞 DNA 链断裂19-21
• 3.3.双酚 A 对 DNA 损伤蛋白（p53 和 p-Chk2 (T68)）表达的影响21
• 3.4.双酚 A 对 INS-1 细胞内 ROS 水平的影响21-22
• 3.5.双酚 A 对 INS-1 细胞内 GSH 水平的影响22-23
• 3.6.氧化应激对双酚A诱发的DNA损伤的影晌23-25
• （四）讨论25-31
• 1.双酚 A 引起 INS-1 细胞的 DNA 损伤26-28
• 2.双酚 A 诱发 INS-1 细胞产生氧化应激28-29
• 3.氧化应激与 DNA 损伤的关系29-31
• （五）结论31-32
• 参考文献32-38
• 综述38-51
• 参考文献44-51
• 攻读学位期间发表论文情况51-52
• 致谢52-53

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 张想竹;侯绍刚;吴明书;;双酚A的环境行为研究进展[J];安阳工学院学报;2006年02期

2 张丽娟,李君,范雪云,姚三巧,白玉萍;双酚A和邻苯二甲酸二丁酯对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖的影响[J];环境与健康杂志;2005年02期

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6 李毅敏,赵树仪;N-乙酰半胱氨酸的研究进展[J];天津药学;2003年02期

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本文编号：636157