邻苯二甲酸丁基苄酯小鼠神经毒性的体内和体外研究

发布时间：2017-08-13 02:08

  本文关键词：邻苯二甲酸丁基苄酯小鼠神经毒性的体内和体外研究

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【摘要】：目前研究已经发现了有关于邻苯二甲酸丁基苄酯(Butyl benzyl phthalate, BBP)的生殖、发育、氧化损伤及内分泌具有一定的毒性干扰作用,然而BBP对动物和人类的神经毒性以及BBP在体内具体的作用机制究竟是怎么样的呢?目前还尚待进一步深入的进行研究与探索。 本研究采用体外细胞活力测定、神经细胞毒性实验、凋亡作用和体内整体动物小鼠行为学实验、酶活测定、显微荧光技术相结合的实验方法,来进行BBP神经毒性的综合评价。本研究还平行比较了BBP、DBP以及它们共同的代谢产物MBP对细胞的毒性效应；通过对脑组织切片进行分析、神经递质的变化情况来初步探讨BBP对小鼠学习与记忆能力的影响情况以及可能存在的分子机制。 本研究在体外研究中主要是通过MTT法和Hoechst33258染色来进行邻苯二甲酸丁基苄酯的细胞毒性评价；通过对染毒细胞ROS、MDA、GSH含量的检测来探究BBP对小鼠神经瘤细胞的氧化损伤效应。分别采用浓度为的BBP、DBP、MBP来染毒细胞,通过对染毒细胞ROS、MDA、GSH含量的检测来比较这三种物质对小鼠神经瘤细胞的毒性强弱。 在进行体内试验时,利用一系列的浓度梯度分别为0(对照组),50,250及1,250mg/kg的BBP连续两个周对实验小鼠进行灌胃染毒,同时通过一系列的行为学经典实验：Morris水迷宫,悬尾试验以及强迫游泳试验,反映BBP对小鼠学习记忆能力的影响。分别测定了脑、肝、肾组织的氧化损伤水平。为了进一步探究BBP毒性的可能存在的分子机制,测得了左脑组织中5-HT ((5-hydroxytryptamine)和p-CREB含量的变化情况。 根据实验结果发现BBP对细胞和组织均有损伤作用。大脑海马切片图显示,随着BBP的暴露,小鼠海马区细胞不完整性逐渐在增加,当BBP的暴露浓度达到了最高浓度组即1,250mg/kg时,海马区细胞开始凋亡,而且约有1/3的背侧海马细胞(控制小鼠空间学习记忆能力)受到损伤,BBP高浓度的暴露造成了海马CA1区与DG区的神经元表现出迟发性的空间学习记忆功能障碍。在BBP暴露之后,降低了神经递质5-HT的水平,从而通过cAMP/PKA所介导的信号通路下调了CREB磷酸化水平,进一步减弱了CREB的下游分子事件,从而影响了行为学的表现。
【关键词】：邻苯二甲酸丁基苄酯 Morris水迷宫 5-HT pCREB 显微荧光观察 cAMP 氧化损伤
【学位授予单位】：华中师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R114
【目录】：

• 摘要6-7
• Abstract7-11
• 1. 文献综述11-17
• 1.1 BBP简介11-12
• 1.2 BBP的理化性质12-13
• 1.3 BBP的来源与用途13-14
• 1.3.1 BBP的来源13
• 1.3.2 BBP的用途13-14
• 1.4 BBP的毒性作用研究进展14-15
• 1.4.1 生殖毒性14
• 1.4.2 发育毒性14-15
• 1.4.3 氧化损伤和内分泌干扰作用15
• 1.5 研究背景、内容以及意义15-17
• 2. 材料与方法17-29
• 2.1 实验材料17-18
• 2.1.1 受试细胞及受试动物17
• 2.1.2 实验仪器17-18
• 2.1.3 实验所需主要试剂及试剂盒18
• 2.2 BBP对N_2a细胞毒性作用实验方法18-22
• 2.2.1 培养N_2a细胞18-19
• 2.2.2 染毒液的配制19
• 2.2.3 细胞铺板和细胞染毒19-20
• 2.2.4 测定N_2a细胞MTT20
• 2.2.5 测定ROS(氧自由基)水平及显微荧光照相20-21
• 2.2.6 BBP对细胞中丙二醛(MDA)含量的影响21
• 2.2.7 BBP对细胞中谷胱甘肽(GSH)含量的影响21
• 2.2.8 观察N_2a细胞凋亡21-22
• 2.2.9 BBP、DBP、MBP的毒性比较22
• 2.3 BBP对昆明小鼠学习和记忆能力影响的实验方法22-29
• 2.3.1 染毒方法22-24
• 2.3.2 Morris水迷宫实验24-25
• 2.3.3 悬尾实验25
• 2.3.4 强迫游泳实验25-26
• 2.3.5 组织匀浆的制备26
• 2.3.6 氧自由基水平的测定26-27
• 2.3.7 丙二醛(MDA)含量的测定27
• 2.3.8 谷胱甘肽(GSH)含量的测定27
• 2.3.9 小鼠大脑海马组织切片分析27-28
• 2.3.10 小鼠脑组织的5-HT和p-CREB的测定28
• 2.3.11 统计学分析28-29
• 3. 实验结果29-45
• 3.1 BBP体外毒性研究结实验结果29-35
• 3.1.1 N_2a细胞形态29
• 3.1.2 MTT实验结果29-30
• 3.1.3 细胞凋亡的染色检验30-31
• 3.1.4 细胞中ROS水平及细胞显微荧光图31-32
• 3.1.5 MDA实验结果32-33
• 3.1.6 GSH实验结果33
• 3.1.7 BBP、DBP、MBP的毒性比较33-35
• 3.2 BBP对小鼠学习与记忆能力影响的实验结果35-45
• 3.2.1 昆明小鼠体重的变化35-36
• 3.2.2 Morris水迷宫的实验结果36-38
• 3.2.3 悬尾实验结果38
• 3.2.4 强迫游泳实验结果38-39
• 3.2.5 BBP对昆明小鼠大脑海马区的影响39-40
• 3.2.6 BBP对小鼠脑部、肝脏、肾脏中ROS水平的影响40-41
• 3.2.7 BBP对脑、肝、肾组织中MDA和GSH水平影响41-43
• 3.2.8 5-HT的改变43
• 3.2.9 脑组织中CREB磷酸化分析43-45
• 4. 讨论45-49
• 参考文献49-55
• 攻读学位期间发表的学术论文55-56
• 附录56-57
• 致谢57

【参考文献】

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本文编号：664816