胸腺细胞分化抗原-1DNA甲基化在硫酸铍致人胚肺成纤维细胞纤维化中的作用研究

发布时间：2017-08-17 09:02

  本文关键词：胸腺细胞分化抗原-1DNA甲基化在硫酸铍致人胚肺成纤维细胞纤维化中的作用研究

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【摘要】：目的观察硫酸铍(Be SO4)刺激下人胚肺成纤维细胞(MRC-5)中胸腺细胞分化抗原-1(Thy-1)DNA甲基化改变情况,Thy-1m RNA及蛋白的变化,纤维化相关因子胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ、α-SMA m RNA及蛋白的改变,探讨Thy-1DNA甲基化在Be SO4致肺纤维化中的作用。用甲基化转移酶酶抑制剂5-氮杂胞苷(AZC)干预MRC-5进一步验证Thy-1DNA甲基化变化。使用组蛋白乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA),观察MRC-5中是否同时存在组蛋白乙酰化。同时观察在这两种抑制剂的作用下,纤维相关因子和Thy-1的表达情况。方法建立离体MRC-5培养实验模型,以终浓度分别为1.0、10.0、100.0μmol/L的Be SO4染毒(设为低、中、高剂量组),对照组不作染毒处理;另设AZC干预组,终浓度为10.0μmol/L的硫酸铍和10.0μmol/L AZC混合液处理组(Be SO4+AZC组)和TSA干预组,终浓度为10.0μmol/L的硫酸铍和0.5μmol/L TSA混合液处理组(Be SO4+TSA组)。分别在染毒24、48和72 h后收集细胞,采用实时定量式聚合酶链式反应检测胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Thy-1 m RNA相对表达水平;巢式降落式甲基化特异性聚合酶链式反应检测Thy-1 DNA甲基化水平;蛋白免疫印迹法(western-blot)检测胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ、α-SMA和Thy-1蛋白的相对表达水平。结果1.MRC-5细胞中胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ和α-SMA的m RNA的蛋白相对表达水平均呈随染毒剂量增加而增加的趋势(P0.05或P0.01));低、中、高剂量组胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ和α-SMA的m RNA和蛋白相对表达水平均呈随着染毒时间的增加而升高的趋势(P0.05或P0.01));AZC和TSA干预后,24、48、72h时间点,Be SO4+AZC组、Be SO4+TSA组3个指标的蛋白相对表达水平均低于中剂量组,差异有统计学意义(P0.05);2.24、48、72h时间点上,中、高剂量组Thy-1 DNA甲基化水平均高于对照组(P0.05或P0.01);低、中、高剂量组Thy-1 DNA甲基化水平呈随染毒剂量增加而增加趋势(P0.05);AZC和TSA干预后,48、72h时间点上,Be SO4+AZC组、Be SO4+TSA组Thy-1DNA甲基化水平均低于中、高剂量(P0.05);3.24、48、72h时间点上,低、中、高剂量组MRC-5细胞Thy-1 m RNA和蛋白的相对表达水平均低于对照组(P0.01或P0.01);AZC和TSA干预后,48、72h时间点上,Be SO4+AZC组、Be SO4+TSA组Thy-1蛋白的相对表达水平均高于中剂量组,差异有统计学意义(P0.01)。结论在硫酸铍刺激下可导致MRC-5细胞纤维化的发生,该过程中Thy-1DNA甲基化程度升高,Thy-1m RNA表达水平降低,可能是硫酸铍致肺纤维化的重要机制之一,在该过程中可能同时存在组蛋白乙酰化。
【关键词】：硫酸铍 胸腺细胞分化抗原-1 胶原蛋白 α-平滑肌肌动蛋白 肺纤维化 DNA甲基化 组蛋白乙酰化 人胚肺成纤维细胞
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R114
【目录】：

• 摘要4-6
• abstract6-8
• 符号说明8-11
• 前言11-15
• 材料与方法15-29
• 结果29-40
• 讨论40-44
• 结论44-45
• 参考文献45-52
• 综述 表观遗传学的DNA甲基化和组蛋白修饰52-63
• 综述参考文献58-63
• 致谢63-64
• 攻读学位期间发表的学术论文64

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本文编号：688128