三邻甲苯磷酸酯对大鼠精原干细胞毒性机制的研究
发布时间：2017-08-19 00:23
本文关键词：三邻甲苯磷酸酯对大鼠精原干细胞毒性机制的研究
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【摘要】：目的：三邻甲苯基磷酸酯（TOCP）在工业中广泛应用，并可导致机体的生殖毒性，但确切机制仍不甚完全清楚。本课题通过观察TOCP对体外培养的大鼠精原干细胞活性的影响，探究TOCP的雄性生殖毒性作用及其相关机理。 方法：1、用MTT法检测TOCP和LPC对分离提取的9d雄性SD乳鼠精原干细胞活性的影响；2、用流式细胞仪和RT-PCR检测TOCP和LPC对大鼠精原干细胞周期的影响；3、用Annexin V-FITC/PI双染色法检测TOCP和LPC对大鼠精原干细胞凋亡的影响；4、用Western blot法检测TOCP和LPC对大鼠精原干细胞自噬蛋白的影响。 结果：1、分离提取9d雄性SD乳鼠精原干细胞，分别用不同浓度的TOCP（0mmol/L、0.25mmol/L、0.5mmol/L和1.0mmol/L）作用于大鼠精原干细胞48h后，MTT法检测细胞活性，结果显示，与对照组相比，TOCP呈浓度依赖式地抑制大鼠精原干细胞活性（P㩳0.05）。2、分别用不同浓度的TOCP（0mmol/L、0.25mmol/L、0.5mmol/L和1.0mmol/L）作用于大鼠精原干细胞48h后，用流式细胞仪检测细胞周期，结果发现，TOCP对大鼠精原干细胞周期无明显影响；RT-PCR法结果显示，TOCP对细胞内相关周期蛋白P21、P27和CyclinD1mRNA的表达也无明显的影响。3、Annexin V-FITC/PI双染色法显示，与对照组（0mmol/LTOCP）相比，不同浓度（0.25mmol/L、0.5mmol/L和1.0mmol/L）的TOCP处理精原干细胞48h后，大鼠精原干细胞凋亡无明显影响。4. Westernblot法检测发现，TOCP可使大鼠精原干细胞中的自噬蛋白LC3-II/LC3-I的比例明显增加，并且使自噬蛋白Atg5和Beclin1表达量也显著增加。5、RT-PCR结果显示，TOCP呈浓度依赖式地抑制大鼠精原干细胞内NTE mRNA的表达。6、分别用不同浓度的LPC（0μmol/L、20μmol/L、50μmol/L和100μmol/L）作用于大鼠精原干细胞48h后，MTT法检测细胞活性，，结果显示与对照组相比，LPC呈浓度依赖式地抑制大鼠精原干细胞活性（P㩳0.05）。7、分别用不同浓度的LPC（0μmol/L、20μmol/L、50μmol/L和100μmol/L）作用于大鼠精原干细胞48h后，用流式细胞仪检测细胞周期，结果发现，LPC对大鼠精原干细胞周期无明显影响；RT-PCR法结果显示，LPC对细胞内相关周期蛋白P21、P27和Cyclin D1mRNA的表达也无明显的影响。8、Annexin V-FITC/PI双染色法显示，与对照组（0μmol/L LPC）相比，用不同浓度LPC（20μmol/L、50μmol/L和100μmol/L）处理精原干细胞48h，对大鼠精原干细胞凋亡无明显影响。9、RT-PCR和Westernblot法结果显示，LPC对大鼠精原干细胞内NTE蛋白及其mRNA的表达无明显影响。10、Western blot法检测发现，LPC可使大鼠精原干细胞中的自噬蛋白LC3-II/LC3-I的比例明显增加，并且使自噬蛋白Atg5和Beclin1表达量也显著增加。 结论：1、TOCP可诱导大鼠精原干细胞自噬并抑制其活性，但对大鼠精原干细胞的周期和凋亡无明显影响；2、 LPC可诱导大鼠精原干细胞自噬并抑制其活性，但对大鼠精原干细胞周期和凋亡无明显影响；3、TOCP可抑制大鼠精原干细胞内NTE mRNA表达，但LPC对大鼠精原干细胞内NTE mRNA表达无明显影响；提示：TOCP可能是通过NTE/LPC途径诱导大鼠精原干细胞自噬，从而影响细胞活性。
【关键词】：三磷甲苯磷酸酯 精原干细胞 神经病靶酯酶 溶血磷脂酰胆碱1
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R114
【目录】：
- 摘要3-5
- ABSTRACT5-9
- 中英文缩略词表9-10
- 第1章 引言10-12
- 第2章 材料与方法12-23
- 2.1 材料12-15
- 2.1.1 动物12
- 2.1.2 主要试剂12-13
- 2.1.3 主要仪器13-14
- 2.1.4 主要试剂及药物的配制14-15
- 2.2 方法15-23
- 2.2.1 分离提取大鼠精原干细胞15
- 2.2.2 MTT 法检测细胞活性15-16
- 2.2.3 流式细胞仪检测细胞周期16
- 2.2.4 Annexin V-FITC/PI 双染色法检测细胞凋亡16
- 2.2.5 逆转录聚合酶链反应检测细胞基因表达16-18
- 2.2.6 蛋白印迹法检测细胞自噬18-22
- 2.2.7 统计处理22-23
- 第3章 结果23-35
- 3.1 TOCP 对精原干细胞活性的影响23
- 3.2 TOCP 对精原干细胞周期的影响23-24
- 3.3 TOCP 对精原干细胞周期蛋白 mRNA 表达的影响24-25
- 3.4 TOCP 对精原干细胞凋亡的影响25-26
- 3.5 TOCP 对精原干细胞自噬的影响26-27
- 3.6 TOCP 对精原干细胞内 NTE mRNA 表达的影响27-28
- 3.7 LPC 对精原干细胞活性的影响28-29
- 3.8 LPC 对精原干细胞周期的影响29-30
- 3.9 LPC 对精原干细胞周期蛋白 mRNA 表达的影响30-31
- 3.10 LPC 对精原干细胞凋亡的影响31-32
- 3.11 LPC 对精原干细胞内 NTE 蛋白及 mRNA 表达的影响32-33
- 3.12 LPC 对精原干细胞自噬的影响33-35
- 第4章 讨论35-41
- 4.1 TOCP 对大鼠精原干细胞活性的影响35-36
- 4.2 TOCP 对大鼠精原干细胞周期的影响36-37
- 4.3 TOCP 对细胞凋亡的影响37
- 4.4 TOCP 对大鼠精原干细胞影响自噬的37-38
- 4.5 LPC 对大鼠精原干细胞自噬的影响38-40
- 4.6 展望40-41
- 第5章 结论41-42
- 致谢42-43
- 参考文献43-47
- 综述47-51
- 参考文献50-51
【参考文献】
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1 张基美,岳良臣,杜永锋,仇宝林,郭宝科,李增民,李慧展,杨家林;亚急性三邻甲苯磷酸酯中毒74例临床分析[J];劳动医学;1997年03期
本文编号：697633
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/yufangyixuelunwen/697633.html
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