人源甲状腺髓样癌噬菌体抗体库的构建及初步鉴定

发布时间：2017-11-08 13:29

  本文关键词：人源甲状腺髓样癌噬菌体抗体库的构建及初步鉴定

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【摘要】：目的：应用噬菌体抗体展示技术,构建大容量天然人源甲状腺髓样癌噬菌体单链抗体库。 方法：提取甲状腺髓样癌病人癌周淋巴结总RNA,通过RT-PCR方法获得抗体可变区基因VH和VL基因片断，以它们为模板分别扩增VH-Linker和VL-Linker，再用SOE-PCR技术将之拼接组装成scFv基因片段后引入酶切位点sfiI和NotI。将scFv基因克隆入噬菌粒栽体pCANTAB-5E后经电转入大肠杆菌Ecoli TG1，，之后经辅助噬菌体M13K07超感染，构建人源甲状腺髓样癌噬菌体单链抗体库。PCR鉴定scFv片段阳性插入率，1.0%琼脂糖凝胶电泳鉴定阳性克隆双酶切产物。 结果：甲状腺髓样癌周围淋巴结总RNA的琼脂糖电泳结果可见清晰的28S、18S条带；VH基因的大小约为370bp，VL基因为350bp，组装后的scFv基因约为750bp。用pUC19标准质粒测定转化效率达到108cfu/μg，scFv的阳性插入率为87.5％(21/24)。结论：成功地构建了人源甲状腺髓样癌噬菌体展示文库，为进一步筛选具有甲状腺髓样癌细胞特异性的人源噬菌体单链抗体奠定了实验基础。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R736.1;R730.44

【参考文献】

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1 赵岩,王清明,付学奇,陈吉中,范国才,陈惠鹏;噬菌体抗体库的构建及抗乳腺癌细胞单链抗体的筛选[J];生物工程学报;2004年05期

2 古雅珏;杨晓仪;张晓坤;;人源性肺癌噬菌体展示抗体库的构建[J];中国医药指南;2012年19期

3 郝言芝;;凡德他尼——首个治疗甲状腺髓样癌药物[J];中国药学杂志;2013年14期

本文编号：1157357