辐射敏感基因作为辐射损伤分子生物标志物的可行性研究

发布时间：2017-11-11 23:16

  本文关键词：辐射敏感基因作为辐射损伤分子生物标志物的可行性研究

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【摘要】：目的探索人外周血中辐射敏感基因受照后的时间、剂量效应及其在健康人本底水平的分布情况,为其发展成为辐射损伤早期分子生物标志物提供实验证据。方法1.通过引物特异性验证,探针非特异性排除,优化反应温度等方式建立荧光定量PCR检测方法,构建候选基因质粒标准品,建立标准曲线。2.利用60Coγ放射源对3名健康人外周血进行照射,照射剂量分别为0、0.5、1、2、4、6、10 Gy,照射后培养0、2、4、8、12和24h,收集外周血,提取总RNA,利用实时定量荧光PCR检测TRAF4、DDB2、POLH、GADD45A及TNFSF9基因的表达量,并拟合不同时间点下的剂量效应曲线。3.本底水平研究,采集29名健康成年人的外周血作为本底组,检验辐射敏感基因在健康人群中的分布情况。4.利用C57BL/6系雄性小鼠进行体内实验的验证,对小鼠直接进行0、2、8Gy剂量的照射,照射后0、4、8、12、24、48、72 h检测TRAF4、DDB2、GADD45A基因在小鼠体内的表达变化情况,验证敏感基因在体内的表达效应。结果1.成功建立了荧光定量PCR检测方法,构建候选基因质粒标准品,建立标准曲线,为后续研究奠定基础。2.人外周血中TRAF4、DDB2、POLH、GADD45A基因受γ射线照射后,有较显著的时间及剂量依赖效应,辐射敏感性好,具有作为辐射损伤分子生物标志物的潜力。3.DDB2、POLH、GADD45A基因本底值较低且分布均一,不受性别、年龄等因素的影响,TRAF4基因受年龄因素影响较大。4.C57BL/6系雄性小鼠体内照射验证,发现TRAF4、DDB2、GADD45A基因时间表达效应与人外周血的表达效应存在不同,可能物种不同或体内外差异导致。结论辐射敏感基因TRAF4、DDB2、POLH、GADD45A具备作为辐射损伤分子生物标志物的潜力。本文中建立的实时荧光定量检测方法操作简便、快速,有希望发展成为一个新的辐射损伤剂量检测的方法。
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R818

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本文编号：1173296