IL-37对模拟失重下LPS诱导炎症反应的防护作用

发布时间：2017-12-04 07:34

  本文关键词：IL-37对模拟失重下LPS诱导炎症反应的防护作用

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【摘要】：背景/目的:构建IL-37b真核表达载体,利用细胞回转培养系统模拟失重,探讨IL-37对模拟失重下LPS诱导炎症反应的防护作用。方法:1.从人PBMCs中提取总RNA,利用RT-q PCR技术扩增出IL-37b基因编码区序列,克隆至p EGFP-N1真核表达载体,将构建的重组质粒p EGFP-N1/IL-37b转染到THP-1细胞中,通过RT-q PCR和Western blot检测IL-37的表达。2.以THP-1细胞为研究对象,利用细胞回转培养系统模拟失重,采用CCK-8法分别检测回转0h、6h、12h、24h、36h、48h对细胞增殖的影响,从而建立细胞失重模型,在此基础上给予LPS刺激细胞,通过RT-q PCR和ELISA技术检测模拟失重下LPS诱导释放的炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的表达。3.利用细胞转染技术实现IL-37b在THP-1细胞中的过表达,通过RT-q PCR、ELISA以及Western blot技术研究IL-37对模拟失重下LPS诱导释放炎症因子的影响。结果:1.双酶切及基因测序结果显示IL-37b基因正确插入真核表达载体pEGFP-N1中;RT-q PCR和Western blot结果显示转染THP-1细胞后,IL-37表达水平明显升高(P0.01)。2.细胞增殖实验结果显示,较短的回转时间(24h)对THP-1细胞的增殖无显著影响,回转48h时模拟失重对细胞增殖的抑制效应最为明显(P0.01)。进一步给予细胞LPS刺激,RT-q PCR结果显示,与单纯给予LPS组相比,三种炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的表达上调(P0.05、P0.01、P0.01);ELISA结果显示,细胞培养液中TNF-α、IL-6、IL-1β的含量较LPS组升高(P0.05、P0.05、P0.05)。3.RT-q PCR结果显示,转染IL-37b后,与未转染组相比,模拟失重下LPS刺激细胞产生的TNF-α、IL-6、IL-1β表达降低(P0.05、P0.01、P0.05),IL-37b明显升高(P0.01),NF-κB降低(P0.05);ELISA结果显示,转染IL-37b后,与未转染组相比,模拟失重下LPS刺激细胞释放的TNF-α、IL-6、IL-1β减少(P0.05、P0.05、P0.05);Western blot结果表明,THP-1细胞在正常条件下可以稳定低表达IL-37,但在模拟失重条件下给予LPS刺激,IL-37的表达较对照组明显升高,同时NF-κB p65的表达也明显升高;将IL-37b转染THP-1细胞后,与未转染组相比,过表达的IL-37可以明显抑制在模拟失重条件下由LPS诱导的NF-κB p65的表达。结论:成功构建了新型抗炎因子IL-37的真核表达载体pEGFP-N1/IL-37b,并初步发现高表达的IL-37可能通过抑制NF-κB的表达最终实现抑制炎症因子的分泌。
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R852.22

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