GRP78和caspase12在急性缺血心肌中表达的实验性研究
本文关键词：GRP78和caspase12在急性缺血心肌中表达的实验性研究
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【摘要】：目的:利用实验动物心肌缺血模型,研究心肌缺血不同时间点HBFP染色特点及GRP78和Caspase12在心肌中的表达。方法:90只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、假手术组、缺血30分钟组、缺血60分钟组、缺血90分钟组、缺血120分钟组,每组15只,利用结扎冠状动脉左前降支的方法建立心肌缺血模型,采用HE染色、HBFP染色法对各组心肌进行染色,观察各组中心肌的形态学表现;应用免疫组织化学(SABC法)技术检测GRP78和caspase12在各组心肌中的表达,并应用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件检测各组心肌中GRP78和caspase12表达的积分光密度(IOD)值;应用Western Blot技术对各组心肌中GRP78和caspase12表达进行定量检测,并用Quantity One软件分析蛋白条带的灰度值,以目的条带的灰度值/内参GAPDH的灰度值作为蛋白的相对表达量。结果:1.碱性复红法(HBFP)染色结果:正常对照组、假手术组、缺血30分钟组、缺血60分钟组、缺血90分钟组、缺血120分钟组各组正常心肌染成黄色,缺血心肌呈红色,各组阳性例数分别为:正常组0例、假手术组2例、缺血30分钟组12例、缺血60分钟组12例、缺血90分钟组13例、缺血120分钟组14例,比较各组间阳性率,正常对照组与假手术组间差异无统计学意义(P0.05),各缺血组与正常对照组间差异有统计学意义(P0.05),各缺血组之间差异无统计学意义(P0.05);2.免疫组化结果:Image-Pro Plus 6.0图像分析软件显示GRP78在正常对照组、假手术组、缺血30分、缺血60分、缺血90分及缺血120分组各组积分光密度(IOD)均数依次为7.8、7.9、136.5、121.5、88.6、69.5;假手术组与正常对照组比较,差异无统计学意义(P0.05),各缺血组与正常对照组比较,差异有统计学意义(P0.05),不同缺血时间点各组间比较,差异有统计学意义(P0.05);Caspase12在正常对照组、假手术组、缺血30分、缺血60分、缺血90分及缺血120分组各组积分光密度(IOD)均数依次为80.9、81.3、81.3、103.3、134.7、164.1;假手术组与正常对照组相比较,差异无统计学意义(P0.05),缺血30分钟组与正常对照组比较,差异无统计学意义(P0.05),其它各不同缺血时间点组与正常对照组比较,差异有统计学计意义(P0.05),不同缺血时间点各组间比较,差异有统计学意义(P0.05);3.Western Blot法检测结果:用Quantity one软件分析指标蛋白/内参灰度值的均数,GRP78/GAPDH在正常对照、假手术、缺血30分、缺血60分、缺血90分、缺血120分均数分别为6.89、6.96、23.83、19.40、15.09、8.09;除缺血120分组外,各不同缺血时间点组与正常对照组相比,差异有统计学意义(P0.05);Caspase12/GAPDH在正常对照、假手术、缺血30分、缺血60分、缺血90分、缺血120分均数分别为0.42、0.42、0.44、0.64、0.76、1.02;除缺血30分钟组外,各不同缺血时间点组与正常对照组相比,差异有统计学意义(P0.05)。结论:1.碱性复红(HBFP)染色心肌缺血时特异性强,但不可以准确确定心肌缺血时间;2.免疫组织化学法及Western Blot法均显示心肌缺血早期GRP78和caspase12蛋白表达发生变化,随着缺血时间延伸,GRP78呈下调改变,Caspase12呈上调改变,且心肌缺血不同时段表达改变呈规律性,提示GRP78和caspase12或可成为心肌缺血与SCD的参考指标。
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：D919
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