BTG2基因的肿瘤放射增敏作用的研究

发布时间：2018-03-02 23:03

  本文选题：BTG2　切入点：BRCA1　出处：《苏州大学》2013年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：BTG2基因是BTG/TOB抗增殖基因家族重要成员之一，作为抗细胞增殖和促进细胞凋亡的分子可能是肿瘤治疗中一重要的靶向治疗基因。目前，国内外对BTG2在肿瘤放射治疗中的影响尚无任何研究报道。本课题旨在了解电离辐射对BTG2表达水平的影响，，以及BTG2基因在肿瘤细胞放射治疗中的作用和可能的相关调节机制，为BTG2作为一新的肿瘤放射治疗靶基因的深入基础研究和临床研究提供实验基础和理论依据。 方法：采用乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231，前列腺癌细胞C33A,子宫颈癌细胞HeLa，肺癌细胞A549等肿瘤细胞作为研究对象。 (1)采用Western blot法检测电离辐射对肿瘤细胞中BTG2蛋白表达水平的影响。 (2)采用pcDNA3-BTG2脂质体转染的方法获得BTG2高表达的乳腺癌细胞MCF-7/BTG2和MDA-MB-231/BTG2稳定转染细胞株，利用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）以及细胞克隆集落形成法了解BTG2表达水平的提高对细胞放射敏感性的影响。 (3)采用免疫共沉淀分析方法检测BTG2与BRCA1蛋白的相互结合和作用。 (4)采用BRCA1基因真核表达质粒以提高BTG2高表达的乳腺癌细胞BRCA1的表达水平了解人为提高BRCA1对BTG2的肿瘤放射增敏作用的影响。采用siRNA-BRCA1以沉默BTG2高表达的乳腺癌细胞中BRCA1的表达水平了解人为降低BRCA1对BTG2的肿瘤放射增敏作用的影响。 (5) Western blot检测姜黄素处理后肿瘤细胞中BTG2的表达水平。 结果： (1)137Cs γ射线照射导致不同肿瘤细胞包括乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231，前列腺癌细胞C33A,子宫颈癌细胞HeLa，肺癌细胞A549肿瘤细胞中的BTG2蛋白和BTG2mRNA的表达水平明显提高，而且辐射诱导的BTG2水平增加与所受到的照射剂量成正相关。 (2)人为地采用pcDNA3-BTG2基因真核表达质粒转染可以明显提高肿瘤细胞中BTG2的表达水平，而且这种BTG2高表达的细胞的放射敏感性明显比未转染BTG2质粒的肿瘤母细胞和转染了pcDNA3空质粒的对照肿瘤细胞的放射敏感性提高。 (3)采用免疫共沉淀分析方法发现BTG2蛋白与BRCA1蛋白直接结合形成复合体。BRCA1明显地下调了BTG2的转录活性，而BTG2则轻微地增加了BRCA1的转录活性。 (4)高表达BRCA1的表达水平明显地抑制了BTG2高表达对乳腺癌细胞的放射敏感性的调节作用，而降低BRCA1的表达水平则提高了BTG2对乳腺癌细胞的放射敏感性的调节作用。 (5)姜黄素处理可以增加肿瘤细胞中BTG2的表达水平。 结论： (1)电离辐射照射可以诱导肿瘤细胞BTG2表达水平的提高，并且呈现剂量依赖性。 (2) BTG2的表达水平与肿瘤细胞的放射敏感性成正相关，提高BTG2的表达可以明显增加肿瘤细胞的放射敏感性。 (3) BTG2蛋白与DNA损伤修复蛋白BRCA1在细胞中形成蛋白-蛋白复合物，BRCA1蛋白水平的改变可以调节BTG2对肿瘤细胞放射敏感性的影响。 (4)姜黄素的肿瘤放疗增敏作用可能与其对BTG2表达水平的调节相关，更进一步提示BTG2可以在放射敏感性调节中起到重要作用。 总之，BTG2是一种新的电离辐射损伤诱导基因，其表达水平改变可以明显影响肿瘤细胞的放射敏感性，为肿瘤放射治疗和放射治疗敏感性提供了新的预测基因标志物。
[Abstract]:Objective: BTG2 gene is one of the important members of BTG/TOB gene family as anti proliferation, anti molecular cell proliferation and promote cell apoptosis may be an important target in tumor therapy to gene therapy. At present, the domestic and foreign influence on BTG2 in tumor radiotherapy there is no research reports. This paper aims to study the expression levels of ionizing radiation effect of BTG2, and the role of BTG2 gene in tumor cells in radiation therapy and possible related regulatory mechanisms for BTG2 as a new tumor radiotherapy target gene into the basic research and clinical studies provide experimental and theoretical basis.
Methods: MCF-7 and MDA-MB-231 of breast cancer cells, C33A of prostate cancer cell, HeLa of cervical cancer cell and A549 of lung cancer cells were used as the research object.
(1) the effect of ionizing radiation on the expression of BTG2 protein in tumor cells was detected by Western blot.
(2) pcDNA3-BTG2 by liposome transfection to obtain the high expression of BTG2 in breast cancer cell MCF-7/BTG2 and stably transfected MDA-MB-231/BTG2 cell line, using four methyl thiazolyl tetrazolium colorimetric assay (MTT) and cell colony formation method to understand the influence of BTG2 expression level on cell radiosensitivity.
(3) immunoprecipitation assay was used to detect the interaction and interaction of BTG2 and BRCA1 protein.
(4) the eukaryotic expression plasmid of BRCA1 gene to improve the expression level of BRCA1 breast cancer cells with high expression of BTG2 is known about the effects of BRCA1 on BTG2 tumor artificially enhance the radiosensitizing effect of BRCA1. Using siRNA-BRCA1 to silence BTG2 expression in breast cancer cells the expression level of human understanding to reduce the impact of sensitization of BRCA1 on BTG2 radiation oncology.
(5) Western blot was used to detect the expression level of BTG2 in the tumor cells after curcumin treatment.
Result锛

本文编号：1558468