大鼠脑、肝组织RNA相对表达量与死亡时间的关系

发布时间：2018-03-07 01:16

  本文选题：mRNA　切入点：miRNA　出处：《青海大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的研究大鼠脑、肝脏组织3种RNA相对表达量与死亡时间(postmortem interval,PMI)的关系,比较两组织用于死亡时间推断的可能性,为RNA在死亡时间推断方面的应用提供理论依据。方法将48只Wistar大鼠随机分为6组,断颈处死后置于海拔2260 m、室温12±1℃、湿度40±2%的环境中,分别于死后0 h、24 h、48 h、72 h、120 h、168 h取大鼠脑皮质及肝右外叶。将一部分脑和肝组织用4%多聚甲醛固定后进行HE染色制片观察。另一部分脑、肝组织提取总RNA,采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-q PCR)技术检测两组织中miRNA(脑特异性miR-124、肝特异性miR-122)及甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、β-肌动蛋白(β-actin)m RNA的循环阈值(cyclic threshold,Ct)。用Best Keeper程序筛选内参,对目的RNA的Ct值进行2~(-ΔΔCt)转换,用SPSS及Graph Pad软件对其进行单因素方差分析;并对ΔCt值进行曲线回归分析,构建回归模型。结果1、脑组织中miR-124的标准差(standard deviation,SD)和变异系数(coefficient of variation,CV)最小,肝组织中miR-122的SD和CV最小。2、脑组织GAPDH、β-actin m RNA的相对表达量2~(-ΔΔCt)在死后72 h内逐渐增加,并于死后72 h达到峰值,之后逐渐下降(P0.05);而肝GAPDH、β-actin m RNA的相对表达量2~(-ΔΔCt)在死后24 h内不变,从死后48 h开始逐渐下降(P0.05)。3、所有目的RNA分子的ΔCt值与PMI的最适回归模型均为三次模型,且肝组织的相关系数r大于脑组织。最适模型的回归方程分别为:y_(脑GAPDH m RNA)=3.280-0.028x+2.343×10~(-4)x~2-5.440×10~(-7)x~3,y_(脑β-actin m RNA)=4.231-0.039x+3.985×10~(-4)x~2-1.103×10~(-6)x~3,y_(肝GAPDH m RNA)=4.965-4.460×10~(-3)x+4.328×10~(-4)x~2-1.666×10~(-6)x~3,y_(肝β-actin m RNA)=5.660-0.019x+6.064×10~(-4)x~2-1.947×10~(-6)x~3。结论1、通过内参筛选,认为miR-124和miR-122可以分别作为脑、肝组织的内参。2、在海拔2260 m、温度12±1℃、湿度40±2%的条件下,大鼠脑组织中GAPDH、β-actin m RNA的相对表达量2~(-ΔΔCt)在死后72 h内逐渐增加,并在72 h达到高峰,之后逐渐下降;大鼠肝组织中GAPDH、β-actin m RNA的相对表达量2~(-ΔΔCt)在死后24 h内不变,从死后48 h开始逐渐下降,肝组织比脑组织更适用于死亡时间推断。3、在海拔2260 m、温度12±1℃、湿度40±2%的条件下,大鼠脑、肝组织中GAPDH、β-actin m RNA的ΔCt值与死亡时间的最适回归模型均为三次模型。
[Abstract]:Objective to study the relationship between the relative expression of three kinds of RNA in brain and liver of rats and postmortem intervalation (PMI), and to compare the possibility of using the two tissues to estimate the time of death. Methods 48 Wistar rats were randomly divided into 6 groups. The rats were killed at 2 260 m above sea level, 12 卤1 鈩，

本文编号：1577311