MiR30b与小鼠Bach2相互作用的研究

发布时间：2018-03-18 20:28

  本文选题：miRb　切入点：小鼠Bach　出处：《航天医学与医学工程》2017年02期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的研究B细胞末端分化过程中miR30b新的作用靶点。方法经生物信息学分析,利用特异性引物以及定点突变引物从小鼠c DNA中分别扩增大小为530、361和189bp三个目的片段,胶回收并对361和189bp进行拼接,获得野生型、突变型小鼠Bach2 mRNA特异性片段,分别与pmir GLO载体连接,构建野生型、突变型重组荧光素酶报告基因质粒pmir GLO-m Bach2、pmir GLO-m Bach2 mt;与miR30b共转染至HEK293 T细胞,分析其荧光素酶活性。结果重组荧光素酶报告基因质粒经双酶切及测序证实构建正确;共转染后,与pmir GLO+miR30b组相比,pmir GLO-m Bach2+miR30b组的荧光素酶活性明显降低(P0.05),而pmir GLO-m Bach2 mt+miR30b组的荧光素酶活性则无明显改变(P0.05)。结论小鼠Bach2 mRNA是miR30b的靶点。
[Abstract]:Objective to study the new target of miR30b during terminal differentiation of B cells. Methods by bioinformatics analysis, three target fragments of 530,361 BP and 189bp were amplified from mouse c DNA by specific primers and site-directed mutated primers, respectively. The wild-type and mutant mouse Bach2 mRNA fragments were isolated from 361-189bp and ligated with pmir GLO vector to construct wild type. The recombinant luciferase reporter gene plasmid pmir GLO-m Bach2pmir GLO-m Bach2 mtwas cotransfected with miR30b into HEK293 T cells to analyze its luciferase activity. Results the recombinant luciferase reporter gene plasmid was correctly constructed by double enzyme digestion and sequencing. Compared with pmir GLO miR30b group, luciferase activity in GLO-m Bach2 miR30b group decreased significantly, but luciferase activity in pmir GLO-m Bach2 Mt miR30b group was not significantly changed. Conclusion Bach2 mRNA is the target of miR30b in mice.
【作者单位】： 山西医科大学;山西医科大学第二临床医学院;
【基金】：山西医科大学博士启动基金(03201426);山西医科大学青年基金(02201518) 山西省面上青年基金(201601D021169)
【分类号】：R85

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本文编号：1631179