负性共刺激分子B7H1和B7H4在不同发育阶段小鼠肠组织的表达及其在肠辐射损伤中的作用

发布时间：2018-10-10 12:30

【摘要】：肠上皮组织作为机体的防御屏障之一,对抵御病原体及有害因子入侵起着重要作用。小肠上皮细胞更新迅速,对电离辐射十分敏感,由此造成的小肠结构和功能损伤的确切机制尚不清楚,从而制约了肠道辐射损伤的救治,也是腹部肿瘤放射治疗领域研究的重要课题。业已表明,电离辐射造成的肠隐窝干细胞及其干细胞龛损伤是肠损伤难以救治的关键机制。尽管目前已发现多种防护药物,如TLRs激动剂等,但如何维持肠区域稳态和保护肠干细胞机制尚不明了。共刺激分子及其介导的共刺激分子调节网络在免疫应答中起到了至关重要的作用。随着研究的深入,人们发现了一群介导免疫下调的负性分子,称之为免疫卡控点(Immune Checkpoints),包括B7H1、B7H3、B7H4等,起到维持免疫稳态为主的调节作用,并已证实可表达于多种免疫细胞及肿瘤组织中,介导肿瘤的免疫逃逸。我们前期的研究发现小肠组织表达B7H1和B7H4分子,但具体作用尚不清楚。鉴于此,本文以B7H1和B7H4分子在不同发育阶段小鼠肠道的表达规律及其与干细胞的相关性为研究基础,建立不同剂量照射造成的肠损伤模型,并采用TLR5激动剂CBLB502进行预防性干预,观测B7H1和B7H4分子在辐射损伤不同阶段肠组织中的表达及对干细胞的影响,以探讨辐射性肠损伤的生物学机制并寻找新的干预措施。第一部分B7H1和B7H4分子在小鼠不同发育阶段肠组织的表达目的分析B7H1和B7H4分子在C57BL/6J和Lgr5-EGFP-ires-CreERT2小鼠不同发育阶段肠道中的表达规律及其与肠干细胞的相关性。方法分别取出生0 w、1 w、3 w、6 w、9 w小鼠小肠和大肠,通过免疫组化观察B7H1和B7H4分子表达水平,进而通过免疫荧光探究其表达位置;并采用Lgr5-EGFP-ires-CreERT2转基因小鼠观察B7H1和B7H4分子的表达与Lgr5干细胞存在何种相关性;结果(1)B7H1和B7H4分子均自3 w开始表达于小肠(空肠、回肠)隐窝底部;(2)免疫荧光表明B7H1位于潘氏细胞内,B7H4位于潘氏细胞胞膜上,两者均不表达于Lgr5干细胞中;(3)结直肠组织未见B7H1和B7H4分子表达。结论本部分研究分别采用野生型c57和lgr5-egfp小鼠,明确了b7h1和b7h4分子在肠道表达的规律及表达位置,从而为下一步的研究奠定了基础。第二部分b7h1和b7h4分子在辐射性肠损伤中的表达及意义目的建立不同剂量照射所致的肠损伤模型,观察b7h1和b7h4分子的表达及其与肠损伤的相关性。方法将6~8wc57bl/6j小鼠分为对照、2gy、5gy、8gy、11gy照射组,给予照射组小鼠200cgy/min的x射线全身照射,取照后不同时间点(6h、1d、3d、5d、7d、10d、14d)的小鼠空、回肠样本,通过he染色观察小肠损伤程度;通过免疫组化和免疫荧光观察正常和受照小肠中b7h1和b7h4的表达水平变化。结果(1)2gy和5gy照射后3~5d小肠结构发生改变,至7d结构基本恢复正常,但5gy照射组恢复缓慢;8gy照射后小鼠存活时间缩短;小肠损伤7d开始恢复;11gy照射后3d小鼠全部死亡,呈现不可逆性损伤;(2)2gy照射后b7h1和b7h4分子在小肠隐窝组织表达未见明显变化;5gy照射3d后b7h1分子小肠隐窝组织潘氏细胞的表达下降,但随着小肠上皮损伤修复时(7d)还呈现表达,b7h4分子在照射后5d表达减少,未能见恢复性表达;(3)大剂量(8、11gy)照射后1~3d时b7h1和b7h4分子在小肠组织的表达明显减少,由于大剂量照射所导致小鼠全部死亡,未能观察到b7h1和b7h4分子表达的进一步变化。结论分别建立了不同剂量照射所造成的肠损伤模型,明确了小剂量照射后b7h1逐渐减少并随小肠结构的恢复而逐渐表达,同时明确了b7h4分子在5gy照射后未能恢复性表达,确切的机制仍需进一步的探讨;大剂量照射后b7h1和b7h4分子明显减少,小肠损伤不可逆,表明免疫卡控点参与辐射所致肠稳态失衡及损伤修复过程。第三部分b7h1和b7h4分子在tlr5激动剂cblb502对辐射性肠损目的采用tlr5激动剂cblb502对不同剂量造成的肠损伤进行预防性干预,观察b7h1和b7h4分子的表达变化及其对干细胞的作用。方法将lgr5-egfp小鼠及c57bl/6j小鼠分为对照、照射组及cblb502照射组,通过免疫荧光和Western Blotting检测小肠干细胞凋亡、增殖、B7H1和B7H4分子的表达变化。结果(1)照射前0.5 h腹腔注射CBLB502可使7 Gy X射线照射小鼠全部存活,明显提高9 Gy、10 Gy全身照射小鼠的存活率和体重;(2)照射前0.5 h注射CBLB502明显减少小肠上皮细胞及干细胞的凋亡,促进其增殖。(3)照射前0.5 h注射CBLB502显著地上调B7H1和B7H4分子在潘氏细胞中的表达,与肠辐射损伤存在相关性。结论证实了照射前0.5 h采用TLR5激动剂CBLB502对不同剂量照射所造成的肠损伤进行干预可上调B7H1和B7H4分子的表达,提示CBLB502对肠辐射损伤的防护可能与上调表达B7H1和B7H4分子,维护组织稳态,促进损伤修复相关。综上所述,本文明确了B7H1和B7H4分子在发育不同阶段小鼠肠道的表达规律及其与干细胞的相关性。并在此基础上建立了不同剂量照射造成的肠损伤模型,继而采用TLR5激动剂CBLB502进行预防性干预,观测到小剂量照射后B7H1逐渐减少并随小肠结构恢复逐渐表达,而B7H4分子在5 Gy照射后未能恢复性表达,大剂量照射后B7H1和B7H4分子明显减少,小肠损伤不可逆。采用TLR5激动剂CBLB502对不同剂量照射所造成的肠损伤进行干预可上调B7H1和B7H4分子的表达,提示CBLB502对肠辐射损伤的防护可能通过上调表达B7H1和B7H4分子,明显减少小肠上皮细胞及干细胞的凋亡,促进其增殖从而提高照射小鼠的存活率和体重。可见负性共刺激分子B7H1和B7H4可维持小肠区域稳态、保护小肠干细胞免受免疫攻击,同时促进辐射所致肠损伤的修复过程。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R818

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 李军华;于皆平;何小飞;徐细明;;核因子-κB在大鼠实验性溃疡性结肠炎肠组织的表达及其意义[J];世界华人消化杂志;2003年02期

2 武雯;刘近春;李俊华;张丽霞;秦涛;;甘氨酸对非酒精性脂肪性肝炎肠组织巨噬细胞移动抑制因子表达的影响[J];中西医结合肝病杂志;2010年04期

3 罗志强,黄明文,杨成义,蒋筱强;一氧化氮在梗阻性黄疸大鼠肝、肾、肠组织损害中的意义[J];江西医药;2003年03期

4 蒋筱强,罗志强,杨成义,黄明文;一氧化氮在梗阻性黄疸大鼠肝、肾、肠组织中含量变化及意义[J];消化外科;2002年03期

5 张燕平;刘萍;;不同辅料制备的中药片与大鼠体外肠组织黏附力的考察[J];解放军药学学报;2007年01期

6 李海峰;李英;程建青;范红斌;;小鼠实验性腹膜炎回肠组织损伤性变化以及苯妥英钠干预的影响[J];胃肠病学;2007年08期

7 邱敬芝,马恒辉,周小军,丁连安;实验性动物肠组织的微波处理法[J];南京军医学院学报;2002年04期

8 任东青;金娟;李晓娟;曾桂英;郭鹞;郭国祯;;电磁脉冲诱导小鼠肠组织基因表达谱的变化[J];卫生研究;2008年01期

9 刘胜利;张建华;俞雄杰;周龙;林进皇;余海;郁毅刚;;火炮打击兔应激防护模型肠组织病理及NMDAr1表达的形态学研究[J];中国当代医药;2013年36期

10 宋铁山 ,甘云波,胡松林;大鼠肠缺血后回肠组织内一氧化氮代谢的变化[J];临床消化病杂志;2002年03期

相关会议论文 前5条

1 朱晓东;马恒辉;马晓军;贾云鹤;;利用微波处理实验性动物肠组织的体会[A];中华医学会病理学分会2005年学术年会论文汇编[C];2005年

2 张诚;盛志勇;胡森;吕艺;于晟;刘毅;;延迟复苏对烫伤大鼠肠组织凋亡相关基因表达的影响[A];中华医学会第六届全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];2001年

3 景姗;王新月;杨雪;杨舒;;溃疡性结肠炎大鼠肺、肠组织中SP-A转录与表达状况及中药的干预中用[A];第二十三届全国中西医结合消化系统疾病学术会议暨消化疾病诊治进展学习班论文汇编[C];2011年

4 任东青;曾桂英;张杰;郭国祯;郭鹞;;电磁脉冲辐照诱导小鼠肠组织基因表达谱的变化[A];第七届全军防原医学专业委员会第五届中国毒理学会放射毒理专业委员会学术会议论文汇编[C];2004年

5 郭世铎;刘洪斌;李东华;王勇;王倩;薛小平;;白及丹参溶胶结合大承气汤对腹腔粘连大鼠肠组织Ⅰ/Ⅲ胶原表达的影响[A];第九届全国中西医结合普通外科学术交流大会暨胆道胰腺疾病新进展学习班论文汇编[C];2005年

相关重要报纸文章 前1条

1 ;重大发现：艾滋病毒藏在肠组织内躲过药物[N];新华每日电讯;2006年

相关博士学位论文 前4条

1 张焱;培土生金中药对脾虚哮喘大鼠肺、回肠组织神经肽水平的影响[D];辽宁中医药大学;2009年

2 李立华;“肺与大肠相表里”关系的生物学机制研究——大鼠肺、肠组织相关性的生理机制研究[D];北京中医药大学;2012年

3 董文鹏;白藜芦醇对肠缺血再灌注损伤的保护作用及研究机制[D];第四军医大学;2011年

4 王玮;双歧杆菌对内毒素损伤幼年大鼠肠道保护机制的研究[D];中国医科大学;2007年

相关硕士学位论文 前10条

1 马延超;负性共刺激分子B7H1和B7H4在不同发育阶段小鼠肠组织的表达及其在肠辐射损伤中的作用[D];苏州大学;2016年

2 董海英;新生大鼠坏死性小肠结肠炎肠组织磷脂酶A_2变化及预防性应用天然蒙脱石对肠损伤保护作用[D];福建医科大学;2010年

3 干晓瑜;通腑汤对急性肺损伤大鼠肺、肠组织SP的影响[D];黑龙江中医药大学;2010年

4 刘晓东;通腑汤对急性肺损伤大鼠肺、肠组织TGF-β1的影响[D];黑龙江中医药大学;2010年

5 赵军博;盐酸戊乙奎醚对新生大鼠内毒素血症时肠组织HIF-1α表达的影响[D];郑州大学;2014年

6 张雪;通腑汤对急性肺损伤大鼠肺、肠组织VIP的影响[D];黑龙江中医药大学;2010年

7 刘佳;通腑汤对急性肺损伤大鼠肺、肠组织bFGF的影响[D];黑龙江中医药大学;2010年

8 龚晓琼;通腑汤对急性肺损伤大鼠肺肠组织PS中SP-A的影响[D];黑龙江中医药大学;2011年

9 尚献会;MCP-1在SAP大鼠胰、肠组织中的表达以及清胰Ⅱ号颗粒剂对其的影响[D];遵义医学院;2009年

10 沈延飞;“肺肠同治”对急性肺损伤大鼠肺和大肠组织中SPA及P38表达影响的研究[D];浙江中医药大学;2012年

，

本文编号：2261773