小鼠脑挫伤后大麻素2型受体的表达变化及其与损伤时间的关系

发布时间：2020-06-04 20:33

【摘要】：目的:大麻素2型受体(cannabinoid type 2 receptor,CB2R)是内源性大麻素系统的重要组织成员之一,是一种七次跨膜的G蛋白偶联受体。本课题组前期研究发现CB2R在皮肤和骨骼肌损伤愈合过程中的表达具有时间规律性,可以作为推断皮肤及骨骼肌损伤时间的参考指标。同时,最新的研究表明CB2R也表达于中枢神经系统的部分神经元及胶质细胞中,CB2R在正常条件下表达水平较低,但具有很高的可诱导性,在脑挫伤等病理条件下CB2R的表达会迅速发生变化,调节炎症反应,发挥神经保护作用。上述研究结果提示脑挫伤后CB2R的表达变化可能与损伤时间具有相关性。本研究通过检测小鼠脑挫伤后不同时间点皮质中CB2R的表达变化情况,探讨其是否可以作为脑挫伤损伤时间推断的生物学指标。研究方法:健康清洁级雄性C57BL/6小鼠,8周龄,72只,体重23~28g。实验小鼠随机分为假手术组和伤后0.5h、1h、3h、6h、12h、1d、3d、7d、14d、21d、28d组,每组6只小鼠。实验组通过Precision Cortical Impactor 3000(PCI3000)装置建立脑挫伤模型。假手术组只进行头皮切开及颅骨开窗,不进行撞击。小鼠经腹腔注射过量麻醉剂处死后,打开胸、腹腔,充分暴露心脏,经左心室缓慢推注磷酸盐缓冲液(PBS)50mL后,取出全脑,沿挫伤区正中冠状切开大脑,一半脑组织提取挫伤区周围2mm脑皮质,用于Western blot检测,另一半用4%多聚甲醛/PBS整体固定后用于组织形态学检查,通过免疫组织化学及免疫荧光染色观察CB2R表达变化情况。结果:1.HE染色结果显示,脑挫伤早期,组织出血、水肿及细胞坏死逐渐加重,同时可见炎症反应逐渐增强,脑挫伤中后期可见新生血管及胶质细胞增生,坏死组织液化吸收,胶质瘢痕形成。2.免疫组织化学染色结果显示,假手术组皮质中少量细胞呈CB2R阳性染色;伤后CB2R阳性细胞比率逐渐升高,于伤后12h达第一次高峰,而后逐渐下降,伤后7d达第二次高峰,随后逐渐下降,至伤后28d基本恢复至正常水平。3.Western blot结果与免疫组织化学染色结果相一致。4.免疫荧光染色结果显示脑挫伤后神经元、单核细胞、星形胶质细胞均有CB2R表达,CB2R~+NeuN~+、CB2R~+CD68~+、CB2R~+GFAP~+细胞比率均呈单峰变化模式,分别于伤后12h、1d、7d达到高峰。结论:1.小鼠脑挫伤后CB2R在神经元、单核细胞及星形胶质细胞中的表达提示其可能参与调节这些细胞的生物学功能。2.脑挫伤后CB2R总体及在神经元、单核细胞及星形胶质细胞中的动态表达均存在时间规律性,有望成为法医学推断脑挫伤损伤时间的生物学指标。
【图文】：

脑挫伤

与假手术组相比，伤后 6h、12h、7d、14d 组 CB2R 的表达具有统计学差异（p<0.05），其余各组比较无统计学差异（p>0.05）（图 4、图 5 及表 2）。图4. 脑挫伤后CB2R Western blot结果

脑挫伤,比率

手术组升高，比较有统计学差异（p<0.05）；其余各组与假手术组相比均无统计学差异（p>0.05），，伤后7d组CB2R阳性细胞比率高于伤后12h组，但二者比较无统计学差异（p>0.05）（图2、图3及表1）。图 2. 脑挫伤后不同时间点 CB2R 免疫组织化学染色，×400A：假手术组；B：脑挫伤后 0.5h；C：脑挫伤后 1h；D：脑挫伤后 3h；E：脑挫伤后 6h；F：脑挫伤后 12h；G：脑挫伤后 1d；H：脑挫伤后 3d；I：脑挫伤后 7d；J：脑挫伤后 14d；K：脑挫伤后 21d；L：脑挫伤后 28d。标尺=50μm
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：D919.4

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