COL1A2及MIF基因遗传多态与心源性猝死风险的关联研究

发布时间：2020-06-25 00:43

【摘要】：第一部分COL1A2基因3’非翻译区插入/缺失多态与心源性猝死风险的关联研究目的:研究位于COL1A2基因3’非翻译区(3’untranslated region,3’UTR)的插入/缺失(Ins/Del,Indel)多态rs3917与中国人群心源性猝死(Sudden cardiac death,SCD)风险之间的关联,并运用基因型-表型关联研究和生物信息学方法探讨该多态在心源性猝死发生发展中可能产生的作用及潜在的分子机制。方法:(1)使用候选基因的方法筛选出一批位于COL1A2基因3’UTR的多态位点,并选取具有潜在功能的七碱基Indel多态位点rs3917作为研究对象。收集79例SCD和328例正常对照的血液样本,分别提取样本基因组DNA并进行PCR扩增及非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行基因分型,使用Logistic回归统计分析该多态与SCD风险之间的关联。(2)采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测具有不同基因型的心肌组织中COL1A2 m RNA的表达量,并分析基因型与m RNA表达量之间的关系。(3)利用生物信息学方法预测可与COL1A2 3’UTR结合且受rs3917多态影响的Micro RNA(mi RNA)(4)构建包含rs3917多态的约300个碱基对的重组质粒p GL3-COL1A2-WT/MT并转染293T细胞系,分为四组,p GL3-COL1A2-WT/MT实验组和对照组,实验组加入mi R-296-3p mimic,对照组加入mimic control,24小时后,运用双荧光素酶报告基因分析系统(Dual-luciferase assay system)检测各转染组的荧光素酶活性,验证mi R-296-3p对COL1A2基因表达的影响。结果:(1)基因分型结果显示,COL1A2基因3’UTR的rs3917位点具有较好的多态性,对照组中的等位基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡(P0.05),说明纳入的样本具有群体代表性。校正性别、年龄风险因素后,运用Logistic回归分析法对实验数据进行统计分析,结果显示:携带Ins/Del基因型的个体较Ins/Ins的个体发生SCD的风险显著增高(OR=1.97,95%CI:1.09-3.56,P0.05,Statistical power=0.647);分析等位基因发现,携带Del等位基因的个体较携带Ins等位基因的个体发生SCD的风险显著增高(OR=1.82,95%CI:1.08-3.06,P0.05)。(2)Real-time PCR结果显示,Ins/Del基因型与心肌组织中COL1A2基因的低表达显著相关。(3)Miranda软件预测结果提示,hsa-mi R-296-3p可能影响COL1A2基因的表达。(4)双荧光素酶分析结果显示,与对照组相比,加入mi R-296-3p后抑制p GL3-COL1A2-WT/MT实验组的报告基因表达,且WT实验组中的抑制作用更明显。结论:(1)在中国人群中,rs3917多态与SCD风险之间存在显著关联。(2)不同基因型的心肌组织与对应的m RNA表达量之间存在显著的基因型-表型关联。(3)rs3917多态插入型序列可能通过干扰COL1A2 m RNA与hsa-mi R-296-3p的结合来影响基因的表达,进而参与SCD的发生。第二部分MIF基因启动子区多态与心源性猝死风险的关联研究目的:研究位于MIF基因启动子区的-794CATT5-8微卫星多态与中国人群心源性猝死(Sudden cardiac death,SCD)风险之间的关联,分析比较该多态在不同人群中的基因型和等位基因频率分布及与不同疾病之间可能存在的关系。方法:(1)采用候选基因的方法筛选出一批位于MIF基因启动子区的多态性位点,并从中选取具有潜在功能的-794 CATT5-8微卫星多态位点作为研究对象。采用病例-对照研究方法,收集79例SCD和313名正常对照的血液样本,分别提取样本基因组DNA并进行PCR扩增及非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对该多态位点进行基因分型,并使用Logistic回归统计分析该多态与SCD风险之间的关联。(2)运用统计学方法分析比较-794 CATT5-8多态在不同国家的等位基因频率分布,分析该多态与不同疾病的关系。结果:(1)-794 CATT5-8多态与SCD风险无显著关联。(2)统计结果显示,在中国人群中,-794 CATT5-8多态的等位基因频率分布与日本相近(P=0.827),与美国及欧洲有显著差异(P=0.005,P=0.0001)。结论:(1)在中国人群中,MIF基因启动子区的-794 CATT5-8多态与SCD风险之间无显著关联。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：D919
【图文】：

的平均年龄为 50 岁（中位年龄 49 岁）；性别方面，男女比例为 10.3∶1。在死亡动方面，根据调查记录，11 例（13.9%）SCD 发生在睡眠中，24 例（30.4%）发争吵或其他强烈的情感活动中，有 42 例（53.2％）是在饮酒或受轻微损伤后发定义为非特异性）。3917 位点基因分型及测序结果不同基因型样本扩增出的片段长度不同，可通过 7%非变性聚丙烯酰胺凝胶连续系统垂直电泳进行区分，银染显色结果为：缺失型纯合子一条带，片段长度为p；插入型纯合子一条带，片段长度为 174bp；插入/缺失杂合子为两条带，长度为 167bp 和 174bp（图 1）。采用桑格测序法对分型结果进行验证（图 2）。分型显示，在 SCD 病例-对照组中 Ins/Ins，Del/Del 和 Ins/Del 三种基因型均可被检测

图 2. COL1A2（rs3917）位点桑格测序图Fig 2. Sequencing analysis of COL1A2（rs3917）：下划线显示的为 rs3917 多态插入的七个碱基序列dy-Weinberg 遗传平衡检验 rs3917 位点在对照组中的基因型分布进行 Hardy-Weinberg 遗传平衡吻合度检结果符合 Hardy-Weinberg 遗传平衡规律（表 3），说明纳入的样本具有群体代表 3. rs3917 位点的 Hardy-Weinberg 平衡吻合度检验结果able 3. Hardy-weinberg equilibrium testing of rs3917 within the control group基因型 Del/Del Ins/Del Ins/In观察值 2 60 266期望值 3 57 267(O-E) 2/E 0.333 0.158 0.004

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本文编号：2728601