MiR-200c调节放射性口腔黏膜炎的病理过程

发布时间：2020-12-09 04:38

　　背景和目的:放射性口腔黏膜炎是接受放疗的肿瘤病人,特别是头颈肿瘤患者最常见的并发症之一。它常常表现为严重的疼痛和溃疡形成。它的发病过程包括五个阶段:起始阶段,初级损伤反应阶段,信号放大阶段,溃疡形成阶段和愈合阶段。但是,放射性口腔黏膜炎的病理过程中关键调控因子依然未知。在本研究中,我们揭示了 miR-200家族中的一员,miR-200c在调节放射性口腔黏膜炎的病理过程中发挥了重要作用。实验方法和结果:本研究建立放射性口腔黏膜炎小鼠模型,发现放射性口腔黏膜炎病理过程中,除了 miR-429,大部分 miR-200 家族成员（miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141）表达显著增高。原代培养人正常角化细胞电离辐射后miR-200c表达亦明显增加。进一步运用miR-200c-3p-shRNA敲减人正常角化细胞miR-200c的表达,发现电离辐射后敲减miR-200c的人正常角化细胞衰老显著减少、细胞增殖能力明显增强。电离辐射引起人正常角化细胞活性氧、p47蛋白明显增加,但是在miR-200c敲减细胞中都被显著抑制,相比于对照组细胞,miR-200c敲减细胞DNA双链... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２?ＭｉＲ－２００家族在?

后表迗量没有明显改变，而ｍｉＲ－２００ａ、ｍｉＲ－２００ｂ、ｍｉＲ－２００ｃ于ＩＲ后２４小时表达??明显升高，并持续到４８小时。在ＮＨＫ细胞中，ｍｉＲ－２００ｃ是整个家族中表达量最??高的，并于辐照后６小时表达即明显增高（图３Ａ）。为进一步研究ｍｉＲ－２００ｃ在??ＲＩＯＭ病理过程中发挥的作用，分别用编码ｍｉＲ－２００ｃ特异性ｓｈＲＮＡ的慢病毒和??阴性对照病毒感染ＮＨＫ，构建了?ｍｉＲ－２００ｃ敲减的稳定细胞系（ＮＨＫ?／?ｍｉＲ－２００ｃ－）??和对照细胞系（ＮＨＫ／Ｃｏｎｔｒｏｌ）。ＩＲ后２、３、７天，在ＮＨＫ／Ｃｏｎｔｒｏｌ细胞系中，??ｍｉＲ－２００ｃ明显表迗增加，而ＮＨＫ?／?ｍｉＲ－２００ｃ－细胞系中，ｍｉＲ－２００ｃ表达量变化不??大（图３Ｂ）。已有研究表明，ＩＲ会导致ＮＨＫ压力诱导的永久性衰老。我们发现??ｍｉＲ－２００ｃ敲减可以明显抑制ＩＲ后细胞的ｐ－半乳糖苷酶活性（衰老标记），并且ＩＲ后??７天，ｍｉＲ－２００ｃ敲减细胞依然具有增殖活力，而８２％对照细胞发生衰老（图３Ｃ）。??细胞克隆形成实验是检测细胞放射敏感性的金标准。观察到ＩＲ后ｍｉＲ－２００ｃ敲减??细胞系的克隆形成率与植板率明显高于对照细胞（图３Ｄ）

氧（ＲＯＳ）生成。因此，我们首先研究ｍｉＲ－２００ｃ对ＩＲ后ＲＯＳ产生的影响。细胞??ＤＨＥ染色后流式细胞仪检测发现ＩＲ后４天和６天，ＮＨＫ?／?Ｃｏｎｔｒｏｌ细胞内有明显??的ＲＯＳ生成，但ＮＨＫ／ｍｉＲ－２００ｃ－细胞中ＲＯＳ产生较对照细胞显著降低（图４Ａ）。??ＩＲ后２、５、７天，ＮＨＫ／Ｃｏｎｔｒｏｌ细胞内ＲＯＳ产生所需的关键酶ｐ４７的蛋白表达??量明显增加，但是ＮＨＫ／ｍｉＲ－２００ｃ－细胞ｐ４７蛋白水平较对照细胞显著降低（图４Ｂ）。??为进一步研究ｍｉＲ－２００ｃ敲减是否影响ＩＲ后的ＤＮＡ损伤修复，进行彗星实验??和Ｙ－Ｈ２ＡＸ免疫荧光染色，这两种方法都是衡量ＤＮＡ双链断裂水平的标准实验。??与ＮＨＫ?／?Ｃｏｎｔｒｏｌ细胞相比，ＩＲ后１０小时，ＮＨＫ／ｍｉＲ－２００ｃ－细胞表现为更短的彗??尾和更小的尾部ＤＮＡ含量百分比（图４Ｃ）。另外，ＩＲ后ＮＨＫ／Ｃｏｎｔｒｏｌ细胞的??细胞核内产生明显的Ｙ－Ｈ２ＡＸ焦点，但在，ＮＨＫ／ｍｉＲ－２００ｃ－细胞内这种焦点明显减??少（图４Ｄ）。与Ｙ－Ｈ２ＡＸ焦点结果相一致


本文编号：2906288