电离辐射对HEK293细胞中MDM2-p53-p21信号传导通路的影响

发布时间：2021-02-28 21:21

　　MDM2-p53-p21通路具有阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡和促进DNA修复作用,从而避免受损DNA堆积,维持遗传的稳定性和防止细胞的转化。本实验采用分析细胞学及分子生物学手段,主要研究了电离辐射对人胚胎肾细胞（HEK293）中p53信号传导通路的影响及其分子调控机制。实验表明,大剂量电离辐射引起HEK293细胞发生死亡,其中以细胞广泛坏死为主,而细胞凋亡率呈降低表现。同时,大剂量电离辐射（2 Gy）作用于HEK293细胞后可诱导P53、P21和MDM2蛋白表达上调。转染p53 shRNA进行基因沉默48 h时, P53蛋白的表达受到完全抑制,而P21蛋白的表达只受到部分程度的抑制,MDM2蛋白表达继续升高,提示p21在HEK293细胞中还存在p53非依赖性调节通路,而MDM2的持续高表达则有助于反向调控P53蛋白,有利于P53表达最终趋于回落。以上结果将为揭示电离辐射对p53信号传导通路的影响提供重要的细胞学基础,并为辐射细胞效应研究提供新的生物学依据。 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
前言
英文缩写
第一章 文献综述
    1. P53 信号传导通路
        1.1 p53 基因
        1.2 MDM2 基因
        1.3 p21 基因
        1.4 MDM2-p53-p21 信号传导通路
            1.4.1 MDM2 与p53
            1.4.2 p53 与p21
    2. 电离辐射对P53 信号传导通路的影响
    3. RNA 干扰对MDM2-P53-P21 信号传导通路的影响
        3.1 RNA 干扰
        3.2 RNA 干扰对p53 信号传导通路的影响
第二章 材料与方法
    1. 主要试剂及器材
        1.1 试剂
        1.2 器材
    2. 主要仪器
    3. 细菌菌株及质粒
        3.1 细菌菌株
        3.2 质粒
    4. 细胞株
    5. 照射条件
    6. DNA 的提取及纯化
        6.1 DNA 提纯
            6.1.1 感受态细菌的制备及质粒转化筛选（无菌操作）
            6.1.2 质粒的大量提取
            6.1.3 质粒的纯化
            6.1.4 质粒的酶切鉴定
    7. 流式细胞术（FLOW CYTOMETRY, FCM）
        7.1 细胞周期的检测
        7.2 蛋白表达的检测
        7.3 细胞凋亡、细胞坏死的检测
        7.4 细胞存活率的检测
    8. 载体构建
        8.1 寡核苷酸的合成与退火
        8.2 线性化载体回收
        8.3 载体连接
    9. 细胞转染
    10. 统计分析
第三章 实验结果
    1. X射线照射对HEK293 细胞存活率的影响
    2. X射线照射对HEK293 细胞凋亡及坏死的影响
        2.1 X射线照射对HEK293 细胞凋亡及坏死的时程变化
        2.2 X射线照射对HEK293 细胞后24 h 细胞凋亡及坏死的剂量效应关系
    3. X射线照射对HEK293 细胞周期的影响
        3.1 X射线照射对HEK293 细胞周期的时程变化
        3.2 X射线照射对HEK293 细胞后24 h 细胞周期的剂量效应关系
    4. X射线照射对HEK293 细胞P53、P21 及MDM2 蛋白表达的影响
        4.1 X射线照射对HEK293 细胞P53 蛋白表达的影响
        4.2 X射线照射对HEK293 细胞P21 蛋白表达的影响
            4.2.1 X射线照射对HEK293 细胞P21 蛋白表达的时程变化
            4.2.2 X射线照射对HEK293 细胞后24 h P21 蛋白表达的剂量效应关系
        4.3 X射线照射对HEK293 细胞MDM2 蛋白表达的影响
            4.3.1 X射线照射对HEK293 细胞MDM2 蛋白表达的时程变化
            4.3.2 X射线照射对HEK293 细胞后24 h MDM2 蛋白表达的剂量效应关系
    5. X射线对P53 沉默HEK293 细胞中P53、MDM2 和P21 蛋白表达的影响
        5.1 pRNAT-U6.1-shRNA 载体构建
            5.1.1 pRNAT-U6.1 载体线性化
            5.1.2 pRNAT-U6.1-shRNA 载体构建
            5.1.3 pRNAT-U6.1-shRNA 载体测序结果
        5.2 X射线照射p53 沉默HEK293 细胞后1 h p53、MDM2 和p21 蛋白表达的变化
        5.3 X射线照射p53 沉默HEK293 细胞后4 h p53、MDM2 和p21 蛋白表达的变化
        5.4 X 射线照射p53 沉默HEK293 细胞后8 h p53、MDM2 和p21 蛋白表达的变化
        5.4 X 射线照射p53 沉默HEK293 细胞后8 h p53、MDM2 和p21 蛋白表达的变化
        5.5 X 射线照射p53 沉默HEK293 细胞后24 h p53、MDM2 和p21 蛋白表达的变化
第四章 讨论
    1. 电离辐射对细胞凋亡、细胞坏死及细胞存活率的影响
    2. 电离辐射对细胞周期的影响
    3. 电离辐射对MDM2-P53-P21 信号传导通路的影响
    4. 电离辐射对P53 沉默HEK293 细胞中MDM2-P53-P21 信号传导通路的影响
结论
参考文献
摘要
    1. 电离辐射对MDM2-P53-P21 信号传导通路的影响
        1.1 电离辐射诱导细胞凋亡、细胞坏死及细胞存活率
        1.2 电离辐射对细胞周期的影响
        1.3 电离辐射对p53、p21、MDM2 蛋白表达的影响
    2. RNA 干扰对MDM-P53-P21 信号传导通路的影响
致谢
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本文编号：3056473