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hUC-MSCs-CM对辐射诱导HT22细胞凋亡及内质网应激PERK通路的影响

发布时间:2021-04-13 07:43
  目的 探讨人脐带间充质干细胞条件培养基(hUC-MSCs-CM)干预对辐射诱导小鼠海马体神经元细胞(HT22)凋亡及内质网应激PERK-ATF4-CHOP通路的影响,阐明其相关的作用机制,为放射性脑损伤(RBI)的防治提供新思路。方法 1采用酶消化法分离培养hUC-MSCs,倒置显微镜下观察细胞形态,流式鉴定细胞表型。选取生长对数期良好的第3代hUC-MSCs用无血清的IMEM培养基继续培养48h,收集上清制备hUC-MSCs-CM。2采用6MV-XRay直线加速器照射HT22细胞制备放射性神经元损伤模型,分别用hUC-MSCs-CM和PERK磷酸化抑制剂GSK2606414干预,设计实验分5组:空白对照组(Control组)、单纯照射组(RT 组)、照射+hUC-MSCs-CM 组(RT+MSCs-CM 组)、单纯 hUC-MSCs-CM 组(MSCs-CM 组)、照射+GSK2606414 组(RT+GSK2606414 组)。各组经上述刺激培养24h后,采用倒置显微镜观察各组细胞形态学变化,采用Annexin V/PI双染色法流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,采用Western Bl... 

【文章来源】:华北理工大学河北省

【文章页数】:62 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

hUC-MSCs-CM对辐射诱导HT22细胞凋亡及内质网应激PERK通路的影响


倒置显微镜下第3代hUC-MSCs细胞形态表现(100×)

抗原,表面,细胞存活率,剂量


第1章实验研究-15-1.2.1.2hUC-MSCs表面抗原鉴定流式细胞仪鉴定表面抗原结果显示:hUC-MSCs表达基质细胞相关的表面抗原CD73、CD90和CD105;不表达造血干细胞标记的CD11b、CD34,不表达CD19,不表达人类白细胞共同抗原CD45和MHC-Ⅱ类HLA-DR(见图2)。图2hUC-MSCs表面抗原鉴定结果1.2.2不同辐射剂量对HT22细胞增殖活力的影响采用6-MV-XRay直线加速器分别给予0、5、10、15Gy射线照射,CCK-8法检测各实验组24h后的细胞活力。实验结果表示:经5、10、15Gy射线照射后的HT22细胞24h后细胞活力发生了不同的变化,与空白对照组相比,5、10、15Gy剂量组细胞存活率较均有所下降,差异有统计学意义(P<0.05)(结果见图3)。同时,10Gy剂量照射后24h细胞存活率与其他实验组相比在50%左右,遂选取10Gy射线剂量进行后续实验。1.2.3不同浓度GSK2606414预处理对辐射后HT22细胞增殖活力的影响GSK2606414是一种新型、高效、高选择性的内质网应激PERK蛋白抑制剂,可显著抑制PERK活性。经不同浓度GSK2606414(0、0.5、1.0、2.0μmol/L)预处理后,采用CCK-8检测辐射后HT22细胞24h细胞存活率。实验结果表示:与Control组相比,0.5、1.0、2.0μmol/L组细胞存活率均升高,其中1.0μmol/L组与其他各组相比,细胞存活率最高,差异有统计学意义(P<0.05)(结果见图4),

存活率,剂量,细胞,细胞存活率


华北理工大学硕士学位论文-16-遂选取1.0μmol/LGSK2606414抑制剂浓度为最适浓度进行后续实验。注:**表示与0Gy组相比,HT22细胞存活率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。图3不同辐射剂量对HT22细胞24h存活率的影响注:*表示与其余各组相比,HT22细胞存活率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。图4不同浓度GSK2606414预处理对辐射后HT22细胞24h细胞存活率的影响

【参考文献】:
期刊论文
[1]细胞自噬与神经退行性疾病机制的研究进展[J]. 冯会超,陈乃耀.  临床与病理杂志. 2018(03)



本文编号:3134903

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