脑挫伤后神经细胞凋亡DNA片段化及含量变化与损伤时间关系的研究

发布时间：2021-06-27 14:39

　　目的观察脑挫伤后神经细胞凋亡DNA片段化和含量变化与损伤时间的相关性，探索损伤时间推断的新方法。方法①建立大鼠自由落体打击脑损伤模型；②对不同损伤时间组的大鼠脑挫伤组织进行TUNEL、Caspase-3免疫组化、Feulgen’s DNA染色，结合图像分析技术和统计学分析，探讨脑挫伤后神经细胞凋亡、DNA片段化和含量的时序性变化；③提取大鼠脑挫伤组织DNA进行琼脂糖凝胶电泳分析，观察DNA片段化随损伤时间的变化特点；④对117例颅脑损伤致死案例进行回顾性分析，探讨其法医学特点；⑤选择不同损伤时间的人脑挫伤组织同样进行TUNEL、Caspase-3免疫组化、Feulgen’s DNA染色和分析，观察上述指标与损伤时间的关系。结果①所建立的自由落体打击大鼠脑挫伤模型与法医学中加速性脑损伤相似，可以用于脑损伤实验和法医学研究。②大鼠脑挫伤后神经细胞凋亡DNA片段化和含量变化（阳性率和阳性细胞的IOD），均与损伤时间呈线性关系，并可以导出直线方程应用于法医学研究。③大鼠脑挫伤组织DNA片段化6h以后出现梯状谱带，DNA片段化程度和片段大小随损伤时间而变化，但无明显线性关系。④颅脑损伤死者在年龄... 

【文章来源】：四川大学四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：135 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

不同损伤时间大鼠脑挫伤半影区Caspas

提取ON^分相操作方法示意图(摘自杭州v-gen.生化技术)。heblockdiagramofoPerationofPhaseeontrastinDNAextraductderectionbyV-genecomPany).Filter，在滤液中加入450p1Buffe:B，混合均匀。DNA一PrePTube置于2mlMicrofugeTube中，把上述repTube中，12000Xg离心lmin。滤液，将DNA一prePTube放置回到原2mlMicrofugefferwl(洗涤液)，1200oXg离心lm讯。滤液，将DNA一prepTube放置回到ZmlMierofugeT加入无水乙醇的BufferWZ(洗涤液)，12000Xg离

脑挫伤2h和4h组仅在电泳起始位置有一条DNA带出现，分子量大于1030bP;6h组自电泳起始端向正极端开始出现数条梯状DNA条带，主要是分子量为1000bp左右的DNA大片段;12h和24h组，出现一系列典型的梯状nNA条带(nNAladder)，分子量在200一1030bp之间的恻A片段条带清晰;48h、72h和96h组，电泳起始端分子量大于1030bp的DNA片段条带逐渐减弱、消失，梯状DNA条带主要表现为DNA小片段，在分子量600一800bp之间条带清晰。正常对照和手术对照组仅在电泳起始位置有大分子DNA片段条带。脑挫伤组与正常和手术开窗对照组差异显著，见图15。

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3253041