BMP2和TGFβ3双基因真核表达载体的构建与鉴定

发布时间：2021-07-01 07:48

　　目的本实验旨在扩增BMP2和TGFβ3基因,并构建含有BMP2和TGF-β3的双基因真核表达载体p工ERS-BMP2-TGFβ3,为研究双基因共转染间充质干细胞及其在体内的表达情况和可能存在的协同效应奠定基础。方法首先,用PCR方法从质粒pGEMT/BMP2中扩增出BMP2基因全长,并将其连入双基因真核表达载体pIRES,筛选出阳性重组质粒pIRES-BMP2；其次,用RT-PCR的方法从人胚胎组织扩增出TGFβ3基因全长,将TGFβ3基因连入质粒pIRES-BMP2；用酶切的方法筛选出阳性重组质粒pIRES-BMP2-TGFβ3,并进行测序鉴定。结果成功的克隆出BMP2和TGFβ3基因,并将其连接到目的载体pIRES中,双酶切和质粒测序证实连接正确,且基因的开放阅读框架正确,pIRES-BMP2-TGFβ3双基因真核表达载体构建成功。结论利用PCR, DNA重组等分子生物学技术,成功构建了双基因真核表达载体pIRES-BMP2-TGFβ3,为进一步研究双基因共转染间充质干细胞,探讨其在体内的表达情况,对间充质干细胞成骨分化的影响及可能存在的协同效应奠定基础。 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：38 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

BMPZ和TGFp3基因扩增产物

图3p工RESesBMPZ一TGFp3重组质粒酶切电泳a.M为Mark，b.1为pIRES一BMPZ一TGFp3用EeoRI酶e.2为pIRES一BMPZ用EeoRI酶切，d.3为pIRES用EeoRI酶切MPZ一TGFp3重组质粒测序一此。，:此几︸一一一一‘︹七!汁廿门川比刀甲…|日门0沉|”11日l日11川川比一朋洲川州的﹁11一860GG月..r3一八︾l，fr川川曰曰月日日川川川日﹃|

【参考文献】：
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本文编号：3258742