放疗通过miR-23a/PTEN通路促进HUVEC增殖及迁移的机制研究

发布时间：2021-07-15 17:02

　　目的：研究放射治疗促进肺腺癌细胞分泌的外泌体携带microRNA-23a对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖迁移的影响及其作用机制。方法：选取HEK293细胞、肺腺癌A549、H1299细胞为外泌体来源,HUVEC作为外泌体受体细胞,实验分组为：HEK293细胞外泌体组,腺癌细胞外泌体组,腺癌细胞外泌体组（4Gy X射线）,并采用microRNA inhibitor对miRNA-23a表达进行敲降。各组采用CCK8、Ki67染色等方法检测HUVEC的增殖能力；通过划痕实验及transwell小室实验比较各组HUVEC的迁移能力。采用real timePCR比较各组microRNA-23a、PTEN等分子的表达,采用Wetern Blot检测各组PT EN、磷酸化AKT （p-AKT）等分子的变化,分析其中机制。结果：本实验发现肺腺癌细胞外泌体可促进HUVEC的增殖及迁移,在肺腺癌细胞受到照射后（4Gy X射线）,这种促进作用得到进一步增强。Real time PCR结果提示肺腺癌细胞照射之后,microRNA-23a的表达上调,同时其外泌体中的microRNA-23a的含量也得到上调,... 

【文章来源】：武汉大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：87 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１载体图谱??设计扩增引物如下：?Ｓ??ｈ－ＰＴＥＮ－３’ＵＴＲ－巧Ｘｈｏｌ）：?ＧＣＣＧＣＣＴＣＧＡＧＴＣＣＡＣＣＣＴＴＴＴＧＡＣＣＴＴＡＣＡＣ??

进行１８个循环；ＰＣ民反应循环后７２‘Ｃ继续延伸７ｍｉｎ，然后４°Ｃ保存。??待ＰＣ民反应完毕之后，取５叫ＰＣＲ产物进行１．５％琼脂糖电泳分析，结果如下图??（图２），图中可从看出，实际结果扩增大小与理论推算的大小相符。??２５??

于３７‘Ｃ条件下培养１２－１６小时。??上的单菌落，溶到３叫水中，取０．５叫做模板，进行ＰＣＲ。，其中包含２．５ｍＭｄＮＴＰｍｉｘｌ＾ｉｌ，２５ｍＭＭｇＣｌ２ｌ．６＾，，?Ｔａｑ?ＤＮＡ?聚合酶（２．５Ｕ／［ｊＪ）?０．３｜ｉｌ，?ＤＮＡ?模板０．５下游引物（ｌＯｍＭ）各０．５叫，并且用灭菌水补足该整为如下模式，预变性：９５’Ｃ?３ｍｉｎ；变性：循环内９８‘Ｃ退火，７２°Ｃ时延伸２分钟；二十个循环；当设置的ＰＣＲ反°Ｃ继续延伸Ｈ分钟，之后在４’Ｃ下保存。??五个菌落，进行ＰＣＲ。完成后，取５叫产物在１．５％琼脂糖算到载体上游及载体下游引物，理论上扩增条带大小中实验结果实际得到的扩増条带如下图（图３），由图可计算的大小相一????

【参考文献】：
期刊论文
[1]HIF-1α与恶性肿瘤放疗敏感性关系的研究进展[J]. 王寒松.  癌症进展. 2015(02)
[2]大肠腺癌组织中的Glut1和HIF-1α蛋白表达及其与癌细胞增殖的相关性[J]. 周玉玲,邓长生.  癌症. 2005(06)
[3]缺氧诱导因子-1α的表达与胰腺癌细胞增殖和凋亡研究[J]. 李力,李玉军.  实用癌症杂志. 2005(01)



本文编号：3286113