大鼠生前与死后损伤的肌肉组织中BECN1、LC3和p62的表达研究

发布时间：2021-07-23 06:06

　　目的:本实验通过检测大鼠肌肉组织挫伤后自噬相关蛋白BECN1、LC3和p62的表达变化情况,并与未损伤、死后挫伤的肌肉组织中这三种蛋白的表达量进行比较,以探索自噬是否可作为生活反应进行生前伤和死后伤的鉴别。方法:随机将12只健康成年雄性Sprague-Dewley大鼠分为未损伤的对照组、损伤后2h、8h和24h组（n=3）,制备大鼠右后肢损伤模型。双重免疫荧光检测自噬蛋白BECN1、LC3和p62的表达以验证损伤是否能诱导肌肉组织发生自噬。随后,再取72只大鼠（同上）随机分为未损伤的对照组、生前伤0.5h、1h、2h、4h、8h、16h和24h组以及死后损伤0.5h、1h、2h和4h组（n=6）,制备大鼠右后肢损伤模型（同上）,正常对照组取大鼠死后1-9d的对侧肌肉组织。Western blotting检测三组中所有样本中的三种自噬蛋白的相对表达量,以及蛋白在不同死后时间的相对含量。结果:双重免疫荧光结果显示大鼠骨骼肌在损伤后自噬蛋白BECN1、LC3和p62的荧光信号增强,其中BECN1和p62在损伤8h后平均荧光强度达最大,LC3在损伤2h即达最大。Western blotting... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

BCA法测9个蛋白标准品的标准曲线

9图 2 Tissue FAXS 200 StrataQuest 分析大鼠肌肉组织的层黏连蛋白和细胞核荧光信号图 2A 正常对照组的大鼠肌肉组织形态 图 2B 损伤后 8 h 的大鼠肌肉组织形态 其中 Laminin（层黏连蛋白）显示红色荧光，细胞核显示蓝色荧光。

山西医科大学硕士学位论文2.1.2 大鼠损伤区肌肉组织细胞核数量变化情况Tissue FAXS200 在识别层黏连蛋白的同时也分别计数了未损伤的对照组、损伤后 2h、8h 和 24h 的大鼠肌肉组织 500×500um2内细胞核的数量（详见表 3）。根据细胞核面积大小不同进行计数，如图 3 所示。其中图 3A 散点图的横坐标是细胞核面积，纵坐标是细胞核的荧光强度，Gate4（蓝色线框）中的细胞核对应着坐标轴中相应的核面积和荧光强度，在荧光分析图中则自动用蓝色的线条圈出；Gate4 之外的细胞核，软件自动用黄色线条圈出。对不同损伤时间的大鼠肌肉组织细胞核进行计数（图 3B）并统计分析（图 3C）发现大鼠肌肉组织在损伤 8h 后细胞核数量开始增加，并且在损伤 24h 后细胞核数量明显增加（n≥3）。

【参考文献】：
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本文编号：3298755