男性血睾酮半定量检测胶体金免疫层析试纸条的研制

发布时间：2017-04-30 03:13

  本文关键词：男性血睾酮半定量检测胶体金免疫层析试纸条的研制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：通过对金标抗体复合物合成条件的摸索、包被抗原以及溶液系统和试纸条材料的筛选,建立男性血睾酮半定量胶体金免疫层析试纸条检测技术。方法：对胶体金质量进行鉴定。通过目测法和酶标仪检测,确定出稳定胶体金溶液的最佳pH和睾酮单克隆抗体的最低浓度。把两种包被抗原进行一系列稀释进行点样,通过观察试纸条的显色效果筛选出合适的包被抗原；把包被抗原做1：50稀释,根据NC膜上检测线的显色程度确定最佳包被抗原稀释液；配置不同的金标抗体复合物稀释液、金标垫处理液,通过检测线和质控线的显色效果、金标抗体的释放速度、抗体残留量情况等筛选出最佳的稀释液和处理液。观察不同型号NC膜上金标抗体层析速度、检测线显色效果,筛选出最佳NC膜；根据红细胞的滤过和血液的凝固现象筛选出合适的样品垫和塑料包装卡。通过正交筛选实验,确定最佳的抗原和金标抗体包被浓度。配置一系列浓度的睾酮标准品,利用专业取色软件,制备标准比色卡。对试纸条进行一系列性能的检测。结果：(1)胶体金直径30nm,符合实验要求。(2)稳定1mL胶体金溶液的最低抗体浓度为24ug,最佳pH为8.3。(3)最佳包被抗原为偶联比25：1的睾酮—BSA。(4)检测线最佳包被抗原浓度为0.465ug/ml,金标抗体的最佳稀释度为4倍稀释度。(5)溶液系统的筛选结果为：包被抗原稀释液为0.01M pH9.6 CBS,金标抗体复合物稀释液为0.01M pH7.4 PBS(含0.1%BSA、5%蔗糖、0.05%Tween-20),金标垫处理液为0.01M pH7.4 PBS(含5%蔗糖、0.5%Tween-20、0.1%叠氮钠)。(6)试纸条各部分材料的筛选结果：NC膜型号为WhatmanAE99,金标垫型号为Ahlstrom8964,全血滤血膜为GF2,塑料包装卡为A-12。(7)试纸条的检测范围为300ng/dl-900ng/dl,浓度间隔为100ng/dl。(7)与类似物无明显交叉反应。具有良好的精密度。在4℃干燥条件下可保存3个月。与Elisa试剂盒比较,符合率达90%。结论：建立了半定量测试男性血睾酮的胶体金试纸条,该试纸条测试范围为300ng/dl-900ng/dl,测试简单快捷,具有良好的特异性和精密度。
【关键词】：胶体金试纸条 血睾酮 全血 比色卡
【学位授予单位】：北京体育大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R446.6;R87
【目录】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-10
• 1 前言10
• 2 文献综述10-24
• 2.1 睾酮特性10-14
• 2.1.1 睾酮的生理特性10-11
• 2.1.2 睾酮在临床与运动实践中的应用11-14
• 2.2 睾酮测试的样本来源14-16
• 2.2.1 唾液睾酮14-15
• 2.2.2 尿液睾酮15-16
• 2.2.3 血清睾酮16
• 2.3 运动领域血睾酮的测试方法16-19
• 2.3.1 放射免疫测定法16-17
• 2.3.2 磁分离酶联免疫测定法17
• 2.3.3 化学发光免疫测定法17-18
• 2.3.4 其他方法18-19
• 2.4 胶体金免疫层析技术19-24
• 2.4.1 胶体金性质和特点19-20
• 2.4.2 免疫胶体金20-21
• 2.4.3 胶体金免疫层析技术的原理21-23
• 2.4.4 胶体金免疫层析技术的应用现状和热点23-24
• 3 胶体金免疫层析试纸条的制备24-30
• 3.1 材料和方法24-30
• 3.1.1 试剂与材料24-26
• 3.1.2 方法26-30
• 4 结果30-49
• 4.1 胶体金质量的鉴定31-32
• 4.2 金标抗体的制备与鉴定32-36
• 4.2.1 胶体金标记睾酮抗体最适浓度的确定32-34
• 4.2.2 胶体金标记抗体最佳pH的确定34-35
• 4.2.3 金标抗体复合物的活性鉴定35-36
• 4.3 包被抗原的筛选36-37
• 4.4 溶液系统与试纸条材料的筛选37-41
• 4.4.1 包被抗原所用稀释液37-38
• 4.4.2 金标睾酮抗体复合物稀释液38-39
• 4.4.3 金标垫处理液39
• 4.4.4 NC膜39-40
• 4.4.5 样品垫选择40-41
• 4.4.6 塑料包装卡41
• 4.5 抗原和金标抗体最佳包被量的确定41-42
• 4.6 标准比色卡的制作42-44
• 4.7 性能检测44-49
• 4.7.1 特异性44-45
• 4.7.2 精密性检测45
• 4.7.3 稳定性45-48
• 4.7.4 与定量试剂盒检测结果一致性评价48
• 4.7.5 重复性48
• 4.7.6 检测结果的保存时间48-49
• 5 分析讨论49-54
• 5.1 胶体金粒径的选择49-50
• 5.2 金标抗体的制备及其储存50-51
• 5.3 NC膜的筛选51
• 5.4 全血滤血膜及塑料包装卡的特殊性51-52
• 5.5 抗原和金标抗体包被量52-53
• 5.6 试纸条的稳定性及保存环境53
• 5.7 标准比色卡的制备53-54
• 6 结论54-56
• 致谢56-57
• 参考文献57-62
• 附录62-63
• 个人简历 在读硕士期间发表的学术论文与著作63

【参考文献】

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