HSV1-tk/FIAU报告基因显像系统在心肌细胞的体外摄取动力学研究

发布时间：2021-10-11 19:09

　　目的构建携带单纯疱疹病毒1型胸苷激酶基因（HSV1-tk）的重组质粒和重组腺病毒载体,对比研究重组腺病毒和脂质体包裹的重组质粒体外转导乳鼠心肌细胞后,对核素标记的报告探针131I-FIAU的摄取和基因表达情况,为核素报告基因心脏显像寻找合适的载体并提供基础。方法1.重组质粒与重组腺病毒的构建及鉴定以含巨细胞病毒（CMV）启动子的pDC316为载体质粒,将报告基因HSV1-tk插入多克隆位点,构建重组质粒pDC316-tk;以pDC316-tk作为重组穿梭质粒,与腺病毒骨架质粒共转染293细胞,包装生成腺病毒重组体Ad5-tk,本部分与北京本元正阳公司合作完成。含增强型绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒Ad5-EGFP作为对照病毒。2.SD大鼠乳鼠心肌细胞培养无菌操作取1～3 d龄SD大鼠乳鼠心室组织,剪成1mm3的组织碎块,采用0.1% II型胶原酶单次消化法消化组织块,1 h差速贴壁法纯化心肌细胞,于37℃、5%CO2环境下培养。生物倒置显微镜下动态观察心肌细胞形态。3.脂质体包裹重组质粒转染体外培养的心肌细胞心肌细胞贴壁生长达90%融合时,重组质粒pDC316-tk经脂质体lipofec... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

pDC316-tk质粒PCR鉴定图

图 2 pDC316-tk 质粒酶鉴定图Takara 公司 DL2000 marker； 1：EcoRI 酶切 pDC316-t酶切 pDC316-tk 质粒； 3：EcoRI+SalI 双酶切 pDC316-M2：Takara 公司 DL15000 marker)33

图 3 重组腺病毒载体 Ad5-tk 的结构示意图图 4 显微镜下的 293 细胞(生物倒置显微镜，×100)A 为正常细胞；B 为出现嗜菌斑的产毒细胞

【参考文献】：
期刊论文
[1]新生SD大鼠心肌细胞培养方法的简化及改良[J]. 王瑞华,兰晓莉,曹国祥,安锐,张永学.  心脏杂志. 2008(02)
[2]FAU的碘化标记及其在小鼠体内的生物学分布[J]. 王瑞华,曹国祥,兰晓莉,何勇,伍军,安锐,张永学.  中华核医学杂志. 2007(04)



本文编号：3431085