重组人卵膜糖蛋白2与精子体外结合的研究及四个DNA遗传标记的多态性调查

发布时间：2021-12-02 09:16

　　研究目的:哺乳动物卵膜糖蛋白（zona pellucida,ZP）是由卵母细胞及颗粒细胞分泌的一种糖蛋白基质,与精子之间存在特定分子上的受体配体识别作用。人ZP分为ZP1,ZP2,ZP3和ZP4,其中ZP2是参与精卵识别过程的二级受体。目前大多数生殖领域方面的研究多集中在ZP2蛋白与获能精子结合的探究上,对与未获能精子结合情况少有研究,且结合环境多比较单一。本实验利用体外受体和配体存在的亲和作用,探讨真核系统表达的重组hZP2蛋白在不同的体外结合环境中与未获能精子的结合情况,期望达到重组蛋白与精子的高效结合,进行法医学方面的应用,为本课题组后续研究中对法医学混合斑中精子的提取及个人识别提供基础。调查中国北方人群DLG2,RBMS3和NAP5基因的三个单核苷酸多态性（SNPs）（rs7479949,rs2053288和rs12612615）以及NAP5基因的一个插入缺失标记（InDel）（rs778533301）频率分布,为法医学个人识别和亲权鉴定提供新的遗传标记,同时探讨其与帕金森病（Parkinson’s disease,PD）的关联性。研究方法:构建pCDNA3.1（+）-ZP2真... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

pCDNA3.1(+)-ZP2重组质粒酶切电泳图

中国医科大学硕士学位论文M：250bpDNA 标准分子量；泳道 1：pCDNA3.1(+)-ZP组 hZP2 蛋白在 HEK293 细胞中的成功表达脂质体转染方法将提取到的 pCDNA3.1(+)-ZP2 重组别转入 HEK293 细胞中，48h 后提取蛋白，用 His 标同进行蛋白免疫印迹验证，结果如图 1-2，转染 ZP2 下方的位置出现一条明显的蛋白条带，且两种抗体约为 96kDa 左右，而未做处理的 HEK293 细胞裂解未出现条带。

图 1-3：纯化后的重组 hZP2 蛋白的免疫印迹分析白 Marker； 泳道 1：纯化前细胞裂解液；泳道 2：与 Bind Resins 过夜混泳道 3：纯化后第三次洗涤产物；泳道 4：50mM 咪唑磷酸盐缓冲液洗脱mM 咪唑磷酸盐缓冲液洗脱产物；泳道 6：150mM 咪唑磷酸盐缓冲液洗200mM 咪唑磷酸盐缓冲液洗脱产物；泳道 8：300mM 咪唑磷酸盐缓冲：400mM 咪唑磷酸盐缓冲液洗脱产物。组 hZP2 蛋白体外与未获能精子的结合LISA 检测重组 hZP2 蛋白表现出浓度依赖性实验运用 ELISA 法绘制出重组 hZP2 蛋白的浓度曲线，用以确精子结合的蛋白最适浓度。分别使用抗 His 标签抗体以及商品抗体孵育不同包被浓度的重组 hZP2 蛋白，进行浓度梯度检测。

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3528145