大鼠肌肉挫伤后组织中时间相关基因表达的研究

发布时间：2022-01-10 10:33

　　目的运用差异显示技术结合硝酸银染色筛选大鼠肌肉挫伤后与正常肌肉表达差异的基因,并通过Real-time PCR方法研究差异基因与损伤时间的关系,旨在寻找一种或几种与损伤相关的敏感基因,为法医学损伤时间推断提供科学、有效的指标。方法1. 12只健康成年SD大鼠随机分为实验组和正常对照组。实验组大鼠建立肌肉挫伤模型,损伤后4小时处死,提取100mg损伤处肌肉组织。对照组大鼠在规定时间内处死,提取相同部位100mg肌肉组织。两组肌肉组织经SV Total RNA Isolation system提取总RNA,并经Agilent 2100 Bioanalyzer进行质量控制检测, SIN值大于8.0的样本经反转录后用于下游实验。2.采用4种锚定引物和3种随机引物共12种组合对实验组和对照组样本进行PCR扩增,扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后硝酸银染色进行差异表达分析。采用煮沸法回收差异条带,并进行二次扩增,扩增产物纯化后与载体连接、克隆,进行序列分析,将测序所得差异序列与GenBank进行同源性比较。3. 4只健康成年SD大鼠随机分为正常对照组和损伤组,提取各组样本的总RNA。在差异序列两端... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：102 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

-12100生物分析仪检测总RNA的完整性及浓度Fig1-1-1EvaluationoftotalRNAintegrityusinganAgilent2100Bioanalyser.

10图 1-1-2 部分 DDRT-PCR 产物琼脂糖凝胶图1，3，5，7，9 为正常肌肉；2，4，6，8，10 为损伤组肌肉；M 为 200bp 分子量标记Fig 1-1-2 Agarose gel electrophoresis of DDRT-PCROTE: There were different mRNA expression levels in the skeletal muscle of contusioneroup and normal group. More than 20 differential bands were found by the Agarose gelectrophoresis.Normal group:1,3,5,7,9. Contusion group:2,4,6,8,10 M: Marker

山西医科大学博士学位论文聚丙烯酰胺凝胶电泳结果锚定引物和随机引物两两组合进行 RT-PCR 反应，扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电行银染显色，其部分结果如图 1-1-3 所示。与琼脂糖凝胶电泳相比，聚丙烯酰胺凝结合银染显色可以获得清晰的条带，分离效果明显增强，且容易对 PAGE 胶进行切收差异条带。本实验采用 PAGE 胶结合银染的方法进行两组间 mRNA 差异显示，共 多条差异条带。M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 M 1 2 3 4 5 6 M 7 8 9 10 M

【参考文献】：
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本文编号：3580557