长链非编码RNA-X53654对肺上皮增殖、迁移和放射敏感性的影响及机制的研究

发布时间：2017-05-12 21:03

  本文关键词：长链非编码RNA-X53654对肺上皮增殖、迁移和放射敏感性的影响及机制的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:本研究通过建立稳定高表达lnc RNA-X53654的Beas-2B细胞株,对差异性表达的基因进行筛选分析,并在体外水平研究X53654对肺上皮细胞增殖、迁移侵袭及辐射敏感性的影响。方法:(1)通过脂质体介导的质粒转染及G418筛选构建稳定高表达X53654的Beas-2B细胞株;(2)利用表达谱芯片筛选分析在高表达X53654的细胞中差异性表达的蛋白质编码基因并通过GO分析和KEGG分析归纳其影响的生物学功能及通路;(3)运用MTT法、流式细胞术、划痕、Transwell和明胶酶谱等试验验证X53654对Beas-2B细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并通过Western Blot验证X53654对上述生物学功能相关蛋白表达的调控;(4)通过RT-PCR验证电离辐射作用后Beas-2B细胞中X53654表达水平的改变;然后运用克隆形成试验验证细胞辐射敏感性的改变;应用流式细胞术检测照后细胞周期的变化;同时采用免疫荧光试验检测γH2AX的形成能力;采用彗星试验检测彗尾形成程度;最后通过Western Blot检测DNA损伤修复相关蛋白的表达。结果:(1)成功建立稳定高表达lnc RNA-X53654的Beas-2B细胞株,通过表达谱芯片筛选分析发现差异性表达的基因集中于免疫、炎症反应、RNA作用机制、细胞骨架运动性以及DNA损伤检查点等方面。(2)高表达X53654可以引起细胞增殖能力增强、迁移能力降低以及侵袭能力增加,Western Blot验证了Occludin、Claudin 1表达下调,MMP-2、MMP-9和β-catenin表达上调,同时TGF-β1、Samd3、SNAIL表达升高。(3)高表达X53654的Beas-2B细胞辐射敏感性降低,照后G1/S阻滞较对照组明显,γH2AX形成增多,彗尾减轻。Western Blot验证ATM、phospho-ATM、Ku80、DNA-PK、TGF-β1和Smad3表达上调,phospho-BRCA表达无明显改变,MRE11、Rad50表达下调。结论:高表达lnc RNA-X53654可能通过引起细胞周期运转速率加快而引起细胞增殖能力增强;同时X53654可使细胞紧密连接蛋白表达减弱,侵袭能力增强,可能是TGF-β/Smad3通路激活引起的上皮表型转换引起;高表达X53654引起细胞辐射抗性增加可能是由于TGF-β/Smad3通路激活引起非同源末端连接修复增强引起,但其确切机制需要进一步研究。
【关键词】：放射性肺损伤 长链非编码RNA 增殖 迁移 侵袭 放射敏感性 DNA损伤修复 TGF-β
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R730.55
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-14
• 参考文献11-14
• 第一部分 高表达LNCRNA-X53654肺支气管上皮细胞模型的建立及差异性表达谱的分析14-33
• 前言14-15
• 材料和方法15-22
• 一、实验材料15-17
• 二、实验方法17-22
• 结果22-29
• 讨论29-30
• 参考文献30-33
• 第二部分LNCRNA-X53654对肺支气管上皮细胞增殖、周期、迁移和侵袭的影响33-54
• 前言33
• 材料和方法33-43
• 一、实验材料33-37
• 二、实验方法37-43
• 结果43-48
• 讨论48-51
• 参考文献51-54
• 第三部分 高表达LNCRNA-X53654对肺支气管上皮细胞辐射敏感性的影响及机制研究54-70
• 前言54
• 材料和方法54-58
• 一、实验材料54-55
• 二、实验方法55-58
• 结果58-64
• 讨论64-67
• 参考文献67-70
• 结论70-71
• 综述71-87
• 参考文献79-87
• 中英文分类词表87-88
• 攻读硕士学位期间科研活动88-89
• 致谢89-90

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