辐射和化学药物诱发DNA损伤上调SOX4蛋白质表达及其功能探讨

发布时间：2022-08-02 13:28

　　SOX4是胚胎发育过程中重要的转录因子,参与心脏、淋巴细胞、神经系统等多种器官的发育。在小鼠胚胎发生过程中SOX4蛋白质表达广泛,但在成年小鼠体内SOX4蛋白质只表达在胸腺、骨髓和生殖腺中。现有研究表明抗肿瘤药物,如etoposide、前列腺素等可以上调SOX4蛋白质表达水平,干涉SOX4蛋白质后将抑制抗肿瘤药物诱发细胞凋亡的功能。Etoposide、DOX等化学药物作用本质是使肿瘤细胞发生DNA链断裂,激活DNA损伤信号通路,使肿瘤细胞发生生长阻滞或是凋亡。本实验目的是研究γ射线、DOX等DNA损伤诱变剂作用细胞后能否调控SOX4蛋白质表达水平;DNA损伤引起的SOX4蛋白质表达水平的变化是否具有生理意义。通过检测γ射线等DNA损伤诱变剂刺激细胞后SOX4的蛋白质水平,以及转录水平的变化,明确了DNA损伤诱发SOX4蛋白质表达上调的现象,但这种变化不是发生在转录水平,提示有可能是蛋白质翻译后修饰的变化使SOX4发生累积。为了确定DNA损伤诱导SOX4上调是否依赖于p53,选用HCT116以及HCT116 1953-/-细胞,检测了γ射线照射后SOX4的蛋白质水平变化,实验结果表明DN... 

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【学位级别】：硕士

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前言
第一部分 SOX4单克隆抗体制备
    材料与方法
        1.材料及来源
        2.实验方法
    结果与讨论
        1.pGEX-KG-SOX4(130-344)aa表达载体菌液PCR鉴定
        2.pGEX-KG-SOX4(130-344)aa表达载体酶切鉴定
        3.pGEX-KG-SOX4(130-344)aa小量诱导
        4.pGEX-KG-SOX4(130-344)aa大量诱导
        5.GST-SOX4(130-344)aa蛋白质定量
        6.BALB/c小鼠GST-SOX4(130-344)aa抗原免疫效果检测
        7.杂交瘤细胞筛选、亚克隆及大量生产结果
        8.通过western blot对SOX4单克隆抗体进行功能检测
    小结
第二部分 DNA损伤诱导SOX4蛋白质上调
    材料与方法
        1.材料及来源
        2.实验方法
    结果与讨论
        1.各个细胞系中SOX4蛋白质表达
        2.γ射线诱导H460、HCT116细胞中SOX4蛋白质表达上调
        3.化学药物引起HCT116、H460细胞中SOX4蛋白质表达上调
        4.DNA损伤诱变剂并不引起SOX4转录水平变化
        5.DNA损伤所引起的SOX4蛋白质水平变化不依赖于p53
    小结
第三部分 SOX4蛋白质在细胞DNA损伤反应中的功能初探
    材料与方法
        1.材料及来源
        2.实验方法
    结果与讨论
        1.检测H460细胞SOX4干涉效果
        2.SOX4促进DNA损伤诱导的促凋亡因子BAX的表达
    小结
总结
参考文献
附录
发表文章
综述
致谢



本文编号：3668610