miR-1和miR-206与下游基因Cx43和HDAC4在大鼠骨骼肌运动性损伤修复中表达变化的研究

发布时间：2017-05-19 17:03

  本文关键词：miR-1和miR-206与下游基因Cx43和HDAC4在大鼠骨骼肌运动性损伤修复中表达变化的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的： 本研究通过沿用课题组前人所建立的大鼠运动性骨骼肌损伤修复的动物模型，连续检测大鼠骨骼肌运动后损伤修复过程中肌肉特异性miRNAs（miR-1和miR-206）的表达变化，并分别从转录和翻译水平观察其下游靶基因的表达变化，期望能更好地了解肌肉特异性miRNAs在骨骼肌运动性损伤修复过程中的作用机制，为丰富和进一步完善肌肉再生理论提供新的实验依据，为运动性肌损伤、基因诊断和治疗等提供新思路。 研究方法： 8周龄健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠72只，体重264.44±11.94g，随机分为安静对照组、运动后即刻组、6小时组、12小时组、1天组、2天组、3天组、1周组和2周组，每组8只。除安静对照组，其余8组大鼠按组进行一次持续性下坡跑训练。跑台训练坡度为-16o，速度为16m/min，，时间为90min。于运动后即刻、6小时、12小时、1天、2天、3天、1周和2周，麻醉大鼠，取其左侧腓肠肌进行HE染色组织学光镜观察，取右侧腓肠肌检测肌肉特异性miRNAs（miR-1和miR-206）的表达水平，利用RT-PCR和Western Blot法分别检测其下游靶基因Cx43、HDAC4的表达变化。 研究结果： 1. HE染色结果 对照组（C组），可见肌纤维呈多边型，细胞紧密排列，形态规则。肌细胞膜完整，细胞核位于肌膜下。运动后即刻（0h组）细胞出现肿胀，细胞体积增大呈圆形，细胞间隙增大。运动后6h、12h、1d到2d组，细胞持续肿胀，细胞间隙较C组稍微减小。运动后3d组，细胞肿胀最为严重，并且出现大量的炎症细胞浸润，并见有血细胞渗出。在运动后1w，炎症细胞浸润减少，到2w时细胞形态结构基本恢复正常，修复过程基本完成。 2.肌肉特异性miRNAs在大鼠肌肉损伤修复过程中表达变化 运动后肌肉特异性miR-1表达整体变化不明显，运动后各组与对照组相比结果差异均无显著性；miR-206的表达整体呈上调趋势，统计结果显示，与安静对照组相比较，只有运动后1w组miR-206的表达水平结果差异具有显著性（p0.05）。 3. miRNAs下游靶基因在大鼠肌肉损伤修复过程中的表达变化 与对照组相比，运动后即刻Cx43、HDAC4mRNA的表达迅速下调，随后各组Cx43、HDAC4mRNA表达逐渐升高；与对照组相比，HDAC4mRNA表达在运动后1w组结果差异具有显著性（p0.05）；Cx43mRNA表达在运动后各组结果差异均无显著性（p0.05）。 与对照组相比，运动后即刻Cx43、HDAC4蛋白水平的表达迅速下调，随后各组表达量逐渐升高回到正常水平，但是在运动后3天时再次出现较明显的下调；统计结果显示，与安静对照组相比，Cx43蛋白水平在运动后0h、3d组结果差异具有显著性（p0.05）；与安静对照组相比，运动后各组HDAC4蛋白水平结果差异无显著性（p0.05）。 结论： 1本研究在课题组前人成功所建的大鼠骨骼肌运动性微损伤修复的模型基础上，发现肌肉特异性miR-1在大鼠腓肠肌运动性损伤修复过程中表达变化不明显，miR-206表达上调，其下游靶基因Cx43在运动后即刻、运动后3天组表达变化显著，提示可能是miR-206通过调节Cx43的表达参与了大鼠腓肠肌的运动性损伤修复过程。
【关键词】：大鼠 腓肠肌 损伤修复 miR-1 miR-206 Cx43 HDAC4
【学位授予单位】：上海体育学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R873
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 英文缩写词表9-12
• 第一部分 文献综述 miRNAs 在骨骼肌损伤修复过程中的调控作用12-19
• 1 miRNAs 的发现、生成及作用机制12-13
• 2 miRNAs 的组织特异性表达及肌肉特异性 miRNAs（MyomiRs）13
• 3 miRNAs 在卫星细胞不同状态以及生肌分化过程中的作用13-15
• 3.1 miRNAs 在维持卫星细胞静息态中的调节作用13-14
• 3.2 miRNAs 在卫星细胞增殖过程中的调节作用14
• 3.3 miRNAs 在成肌细胞分化融合过程中的调节作用14-15
• 4 miRNAs 在骨骼肌修复过程中的研究15-16
• 5 miRNAs 在骨骼肌修复过程中的信号通路16
• 6 结语16
• 参考文献16-19
• 第二部分 miR-1 和 miR-206 与下游基因 Cx43 和 HDAC4 在大鼠骨骼肌运动性损伤修复中表达变化的研究19-40
• 前言19-20
• 1 研究材料、对象与方法20-29
• 1.1 技术路线图20-21
• 1.2 主要试剂21-22
• 1.3 主要仪器与设备22-24
• 1.4 实验对象、分组与运动方案24
• 1.4.1 实验对象24
• 1.4.2 实验分组24
• 1.4.3 运动方案24
• 1.5 动物取材24
• 1.6 肌组织 HE 染色24-25
• 1.7 RT-PCR 检测 miRNAs 及其靶基因 mRNA 表达25-27
• 1.7.1 Trizol RNA 抽提及质量检测方法25
• 1.7.2 cDNA 合成25-26
• 1.7.3 实时定量 PCR 反应的详细过程26-27
• 1.7.4 实时定量 PCR 使用引物的列表27
• 1.8 Western blot 法检测 miRNAs 下游靶基因蛋白表达27-29
• 1.8.1 western blot 所需试剂配置27-28
• 1.8.2 组织总蛋白的提取28
• 1.8.3 测定蛋白含量28
• 1.8.4 SDS-PAGE 电泳28
• 1.8.5 转膜28-29
• 1.8.6 免疫反应29
• 1.8.7 凝胶图像处理29
• 1.9 数据统计处理29
• 2 结果29-33
• 2.1 腓肠肌 HE 染色29-30
• 2.2 大鼠骨骼肌运动性损伤修复过程中肌肉特异性 miRNAs 表达变化30-31
• 2.3 肌肉特异性 miRNAs 的下游靶基因的表达变化31-33
• 2.3.1 肌肉特异性 miRNAs 的下游靶基因 mRNA 水平的表达变化31-32
• 2.3.2 肌肉特异性 miRNAs 的下游靶基因蛋白水平的表达变化32-33
• 3 分析讨论33-37
• 3.1 大鼠骨骼肌运动性损伤修复模型的建立33
• 3.2 参与肌肉运动性损伤修复的 miRNAs33-35
• 3.3 肌肉特异性 miRNAs 在运动性损伤后肌肉再生过程中的作用35-37
• 3.3.1 miRNAs 靶基因 mRNA 与蛋白表达的变化趋势35-36
• 3.3.2 运动性损伤修复过程中两个特殊的时间点36-37
• 4 结论37
• 参考文献37-40
• 致谢40

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 张胜年,陆爱云;骨骼肌运动损伤实验研究中的动物模型[J];中国运动医学杂志;2000年02期

  本文关键词：miR-1和miR-206与下游基因Cx43和HDAC4在大鼠骨骼肌运动性损伤修复中表达变化的研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：379242