全基因组核小体保护遗传标记的筛选及法医学应用探索研究

发布时间：2023-04-19 23:28

　　目的:构建适用于降解检材的核小体保护遗传标记法医学复合检测体系。由于核小体核心DNA受到组蛋白八聚体的保护,因此,在这区域内的DNA不易被降解。本课题旨在筛选人体组织DNA中受到核小体组蛋白八聚体保护的遗传标记并建立基于二代测序技术的检测复合体系,从而实现对降解检材的检测。方法:使用微球菌核酸酶对不同组织样本DNA进行消化,并对消化后的DNA片段进行文库制备和定量,使用Hi Seq测序平台进行测序。通过生物信息学的方法筛选出适用于法庭科学检验的SNPs(single nucleotide polymorphisms,SNPs,单核苷酸多态性)位点。通过对引物,复合扩增体系及其反应条件等方面的优化,建立基于二代测序技术的复合检测体系,并对该体系对于法医学样本的进行评估检测。结果:在心肌等组织样本核小体核心DNA测序中共找到11,897,115个SNP位点,其中226,395个SNP位点符合多态性频率接近0.5。最终建立了包含有40个SNP位点二代测序技术的复合检测体系。该体系对1ng模板量的检测准确率为100%,DNA模板量为0.1ng时,检测准确率可达到90%,对静脉血游离细胞DNA检...

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

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前言
第一部分 核小体核心DNA提取和高通量测序
    1 材料与方法
        1.1 样本来源
        1.2 主要仪器
        1.3 主要试剂
        1.4 主要试剂配置
        1.5 核小体核心 DNA 提取
        1.6 核小体核心 DNA 测序
    2 结果
    3 讨论
    4 结论
第二部分 复合体系构建与优化
    1 材料与方法
        1.1 样本处理
        1.2 主要仪器
        1.3 主要试剂
        1.4 主要试剂配置
        1.5 特异性遗传标记筛选
        1.6 引物设计与评估
        1.7 复合体系的优化
        1.8 复合体系高通量测序和数据分析
    2 结果
    3 讨论
    4 结论
第三部分 复合体系验证
    1 材料与方法
        1.1 样本来源
        1.2 主要仪器
        1.3 主要试剂
        1.4 主要试剂配置
        1.5 全基因组DNA提取
        1.6 DNA纯化浓缩
        1.7 游离DNA提取
        1.8 机械打断
        1.9 核酸酶消化
        1.10 标准DNA稀释
        1.11 复合体系验证
        1.12 降解检材STR验证
    2 结果
    3 讨论
    4 结论
参考文献
综述
    参考文献(References)
附录
致谢
在学期间承担/参与的科研课题与研究成果
个人简历



本文编号：3794423